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一管式双链cDNA合成试剂盒说明书
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上传时间：2015/10/26 10:56:13
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上 传 者：北京百奥莱博科技有限公司
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| 产品及特点 | 本产品是用于一管式双链cDNA合成的试剂盒。cDNA第一链合成的原理是以OligodT为通用引物的、MMLV催化的逆转录反应。其原理如下： cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其原理图如下： 本产品具有下列特点： 1. 即开即用，含有合成两条cDNA链的所有试剂。 2. 适用于含poly rA的RNA，对不含poly rA的RNA（如细菌RNA），不能使用本试剂盒制备ds cDNA。 3. 一管式进行，第一链cDNA合成后不需要任何处理，直接进入第二链的合成。 4. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。 5. 本试剂盒足够10次80uL体系的双链cDNA合成反应。 6. 如果需要合成全长cDNA，最好选用SMART 全长cDNA双链合成试剂盒。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格及成分 |
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| 运输及保存 | 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 自备试剂 | mRNA提取试剂盒 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 一：mRNA的制备 本试剂盒不提供mRNA提取试剂，用户需自备相关试剂。 二：双链cDNA的合成 1. 在一个干净的塑料离心管中，按下表设置cDNA合成反应：
注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。 2. 电泳5uL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。 3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等实验。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 关联产品 | SMART全长cDNA第一链合成试剂盒、一管式SMART 全长cDNA双链合成试剂盒 | ||||||||||||||||||||||||||||||
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