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虾碱性磷酸酶说明书

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虾碱性磷酸酶使用说明书
产品及特点
Shrimp Alkaline Phosphatase(SAP)虾碱性磷酸酶与大肠杆菌来源的碱性磷酸酶同样,催化所有磷酸单酯的水解,不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解,也能催化 ATP 等焦磷酸键水解。但该酶与大肠杆菌来源的 BAP以及小牛肠来源的CIAP不同,通过65℃,15分钟的热处理,可使酶完全不可逆失活。其作用原理图如下:
本产品具有下列用途:
1.     去除DN段的 5’-末端的磷酸基。防止线状DNA的自身环化(Self-Ligation)。
2.     除去PCR反应后残存的dNTP。PCR产物进行测序时,在反应体系中如果有多余的 Primer 和dNTP,将影响测序反应的正常进行。使用 Exonuclease I 分解残存的 Primer;用 SAP 处理可降解多余的 dNTP,之后不需要对 PCR 产物进行精制,立即可以进行测序反应。
活性单位定义
在37℃、pH9.8的条件下,1分钟内水解对硝基苯磷酸盐(p-nitrophenol
phosphate)生成1 μmol的对硝基苯酚(p-nitrophenol)所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
纯度
1.    5 U的本酶和1 μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。 
2.    5 U的本酶和1 μg的16S,23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
Buffer成分
储存Buffer: 25 mM Tris-HCl, pH7.6(4℃);5 mM MgCl2;50% Glycerol。  
缓冲液Buffer,10×:500 mM Tris- HCl, pH9.0(37℃);50 mM MgCl2。
 
成   份
编号
300 U包装
虾碱性磷酸酶(1U/μL)
BTN120403A
300 U
10×Buffer
BTN120403B
1 mL
运输及保存
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法
使用举例:
1.    在1.5 mL离心管中配制下列反应液,定容至50 μL。
成 份
用量
DNA Fragment  
    1~10 pmol
Shrimp Alkaline Phosphatase (1~5 μL)
1~5 U
10× Buffer  
5 μL
dH2O
up to 50 μL
2.    37℃反应15~30 分钟。
3.    65℃反应15分钟(加热失活)。
4.    加入2.5 μL的3 M NaCl(终浓度150 mM)。
5.    乙醇沉淀(加入125 μL(2.5倍量)的预冷无水乙醇,-20℃放置30~60分钟,离心。
6.    加入200 μL的70%冷乙醇清洗沉淀后,干燥。
7.    TE Buffer(<20μL)溶解沉淀。
关联产品
碱性磷酸酶,牛小肠(BTN120404)
碱性磷酸酶,大肠杆菌(BTN120405)
 

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