有哪些方法可以降低基质效应的影响？

首先可以通过样本稀释来减轻基质效应，这是最简单常用的手段。基质里干扰组分的浓度会随稀释同步下降，很多基质干扰属于浓度依赖性，找到最低有效稀释倍数，在不损失检测灵敏度的前提下把样本稀释到干扰可以接受的区间。缺点是待测物浓度很低的时候，过度稀释会低于检出限，不适合低丰度样本。

其次是样本前处理，根据干扰物类型选择处理方式。脂血样本可以高速离心脱脂或者有机溶剂萃取脱脂，去除脂蛋白这类疏水干扰物；高白蛋白样本可以用白蛋白去除试剂盒或者亲和沉淀处理；存在核酸大量释放的组织匀浆，可以加入核酸酶降解核酸；有蛋白酶干扰的样本，提前加入蛋白酶抑制剂防止抗原降解；溶血样本优先离心去除红细胞碎片，严重溶血样本直接弃用。蛋白沉淀也可以用来去除大量杂蛋白，但要注意沉淀步骤会不会带走目标待测物。

然后是固相耗材的调整，也就是更换合适结合力的 ELISA 板条。基质里带电杂蛋白多、静电竞争吸附明显时，把高结合力板换成中结合力板，减少杂蛋白在板面的静电吸附，降低位点竞争。这个方式对吸附型基质效应改善效果突出，但不能解决异嗜性抗体这类免疫层面的干扰。

优化封闭和洗涤体系也能缓解基质效应。更换封闭剂，BSA、酪蛋白、脱脂奶、鱼明胶可以按需替换，有些基质在脱脂奶封闭下背景高，换成纯化 BSA 会更稳定；洗涤液中调整 Tween-20 的比例，适度提升表面活性剂浓度，帮助洗脱非特异吸附的蛋白，同时控制浸泡洗涤时间；也可以在封闭液或者样本稀释液里加入少量无关 IgG，提前封闭板面多余吸附位点。

在样本稀释液中添加阻断剂，专门应对免疫类基质干扰。加入异嗜性抗体阻断剂、类风湿因子阻断剂，用来阻断异嗜性抗体、RF 带来的假阳性和信号漂移；也可以在稀释液里加入无关血清，中和基质中交叉反应的抗体。这类手段主要针对免疫识别层面的干扰，对板面吸附竞争干扰改善有限。

调整缓冲液理化条件也有帮助，改变包被液、样本稀释液的 pH 和离子强度。pH 会改变蛋白带电状态，调高或者调低 pH 可以减少干扰组分与板面的静电结合；提高离子强度，增加溶液里盐离子浓度，削弱静电吸附作用，降低带电杂蛋白挂板，不过离子强度太高也可能影响抗原抗体结合，需要预实验摸索范围。

改用基质匹配标准曲线或者标准加入法，不去消除基质效应，而是抵消基质效应带来的定量偏差。不用缓冲液配制标准品，改用阴性基质来配制标准系列，标准品和样本处在相同基质环境中，校正基质带来的系统偏移。找不到阴性基质的时候采用标准加入法，适合内源目标物无法去除的样本，多用于定量检测。

还有 ELISA 模式的调整，部分体系可以更换检测模式。夹心法相比间接法、竞争法抗基质干扰能力更强；竞争法容易受基质影响，可以重新优化包被抗原的偶联方式、包被浓度，降低基质组分的竞争影响。

还有样本分组预处理和质控策略，脂血、溶血、黄疸样本单独归类处理，不跟正常样本混测；设置基质空白、基质加标对照持续监控基质效应。如果多种方式尝试之后干扰依旧明显，就需要评估这个方法本身不适合该基质，更换检测方案。

需要注意，不同手段针对的干扰类型不一样，稀释、换板条、调缓冲液、前处理更多解决吸附类基质效应，阻断剂主要解决免疫类干扰，基质匹配标曲只是校正定量偏差，没有消除干扰本身，实际实验里经常多种方式组合使用。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司