用于 ELISA 实验的样本需要满足什么条件？

一、样本基质基本要求

靶标抗原 / 抗体保持完整，不被降解。蛋白类靶标最容易被蛋白酶降解，组织、细胞裂解样本必须添加蛋白酶抑制剂，样本采集后尽快低温处理。

无明显基质干扰，基质成分不能显著影响抗原抗体结合。盐浓度、pH、内源性蛋白、脂类、血红蛋白、胆红素、黏蛋白、尿素、多酚等都会带来基质效应，严重时造成假阳性、假阴性或曲线偏移。

液相上清状态，无可见沉淀、细胞碎片、絮状物。固体颗粒会吸附蛋白、造成孔底非特异吸附，还可能堵洗板针；有沉淀必须离心，必要时 0.22μm 过滤。

二、外观与质控指标

溶血：尽量无 / 轻微溶血。红细胞破裂释放血红蛋白，会增加背景，部分试剂盒会直接干扰抗原抗体反应；重度溶血样本建议弃用。

脂血：无明显乳糜。大量脂滴会包裹抗原，还会在孔壁形成薄膜，升高背景；高脂样本可高速离心去除上层脂层。

黄疸：高胆红素样本谨慎使用，胆红素可改变局部 pH，造成吸光度偏移。

颜色浑浊：浑浊样本优先离心澄清，若离心后仍浑浊，评估基质效应再决定是否可用。

三、采集、处理与保存条件

采集后及时分离上清。血液样本静置 / 离心分离血清或血浆；组织、细胞样本裂解后离心取上清；灌洗液、体液及时去除细胞沉淀，避免细胞裂解释放蛋白酶。

pH 维持接近生理范围，剧烈酸碱环境会破坏抗原抗体构象。

避免反复冻融。蛋白类靶标反复冻融易变性降解，样本建议一次性分装。短期 4℃保存（一般不超过 24h，看靶标），长期 - 20℃或 - 80℃，避免放普通冰箱反复开关的门格。

微生物污染控制。细菌增殖会分泌蛋白酶降解靶标，同时菌体蛋白引入非特异结合；体液、尿液样本尤其容易长菌，必要时添加抑菌剂，不可使用会破坏靶标的防腐剂。

四、浓度与样本稀释适配性

靶标浓度落在试剂盒标准曲线检测范围内。浓度过高会出现钩状效应，造成结果假性偏低，需要预实验预估、适当稀释；浓度低于检出限只能报低于 LOD。

稀释后基质尽量匹配标准品基质。如果样本基质和标品稀释液差异大，要做基质匹配或基质效应验证，否则定量偏差大。

五、特殊样本附加条件

组织 / 细胞裂解上清：需要测定总蛋白浓度，最终结果用总蛋白校正；裂解液成分（去污剂、还原剂）浓度不能过高，过量 Triton、SDS 会破坏抗原抗体复合物。

尿液、唾液、BALF 这类低蛋白样本：注意浓缩方式，浓缩过程不能造成靶标损失；尿液通常需要肌酐校正。

外泌体裂解样本：去除游离蛋白污染，裂解试剂不能残留过量，防止抑制免疫反应。

六、排除项（不符合条件，不建议直接检测）

严重溶血、重度脂血且无法处理的样本

大量絮状沉淀，过滤后仍浑浊

明显微生物污染、有异味

样本 pH 严重偏离试剂盒推荐范围

裂解试剂 / 抗凝剂浓度超标，抑制抗原抗体结合

经过多次冻融，靶标不稳定（可做稳定性预实验评估）

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司