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“上海恒远”文献：ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

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上传时间：2019/5/24 11:22:50

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实验研究
郭延伟李松房殿吉＊
（佳木斯大学附属口腔医院颌面外科黑龙江佳木斯１５４０００）

［摘要］目的：探讨ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究的可行性。方法：３６只新西兰大白兔随机分为３组，每组１２只，双侧下颌骨制备缺损模型。Ａ组植入ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ复合载蛇床子素支架材料；Ｂ组植入ＢＭＳＣｓ复合载蛇床子素支架材料，Ｃ组单植入纳米羟基磷灰石支架材料。分别于术后２、４、８、１２周处死实验动物，制备组织标本，行大体观察、影像学分析、ＨＥ染色、扫描电镜检测，并对影像学分析值及成骨情况加以评价，对分析数据结果使用ＳＰＳＳ１７．０统计软件进行分析，Ｐ＜０．０５有统计意义。结果：影像学检查及组织学染色显示Ａ组骨缺损处愈合程度，成骨速度及其质量明显优于Ｂ组Ｃ组；扫描电镜显示Ａ组该复合材料与组织相容性好，无炎症刺激反应；统计牙ＣＴ分析数据及新生骨面积，Ａ组的成骨情况明显优于Ｂ组与Ｃ组（Ｐ＜０．０５）。结论：ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ复合载蛇床子素支架材料有明显骨诱导作用，是一种新型复合材料，可望成为临床应用中修复颌骨缺损的新型材料。

［关键词］骨颌骨缺损骨髓间充质干细胞ＢＭＳＣｓ富血小板纤维蛋白ＰＲＦ蛇床子素Ｏｓｔｈｏｌ
［中图分类号］Ｒ７８２．４
［文献标识码］Ａ
［文章编号］１６７１—７６５１（２０１２）１１—１０８７—０５

下颌骨功能结构复杂，而造成其缺损的原因也很多，若不及时进行修复或修复不当，则常常会造成骨不连或延迟愈合等严重后果。随着当代组织工程学及分子生物学的迅猛发展，利用干细胞作为种子细胞复合支架材料修复骨缺损成为近年来研究的热点，骨髓间充质干细胞（ＢＭ－ＭＳＣｓ）以其多项分化的潜能及自身所具有的遗传背景稳定和对机体无免疫排斥反应等优点成为理想的种子细胞［１～３］。ＰＲＦ是继富血小板血浆（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈｐｌａｓｍａ，ＰＲＰ）后第２代血小板浓缩液，以血小板凝胶形式呈现，其所内含的高浓度的生长因子能促进骨组织和软组织再生修复，单独或联合其他生物材料注人硬组织缺损或软组织创伤处，可以修补缺损，诱导生长，加速局部创伤的愈合并提高愈合质量［４～６］。实验证明，蛇床子素可促进大鼠骨髓间充质干细胞（ＢＭ－ＭＳＣｓ）的增殖及向成骨细胞分化并抑制其向脂肪细胞分化，而且蛇床子素具有促进成骨细胞增殖的能力［７，８］。本研究将骨髓间充质干细胞作为种子细胞，以载蛇床子素的羟基磷灰石为支架材料，结合ＰＲＦ中多种生长因子及其诱导并促进成骨修复兔下颌骨缺损，为临床应用提供了理论依据。
１材料与方法
１．１实验动物健康新西兰大白兔３６只，体重２．
０～３．０ｋｇ，３～６月龄，雌雄不限，（由佳木斯大学动物实验中心提供），材料及仪器：医用纳米级羟基磷灰石（上海源叶生物科技有限公司），蛇床子素（上海恒远生物科技有限公司），离心机，ＪＳＭ－６３６０ＬＶ扫描电镜，倒置相差显微镜，牙ＣＴ。
１．１．１骨髓间充质干细胞的获取及培养无菌条件下，骨髓穿刺针兔双侧股骨大转子处抽取骨髓３～５ｍＬ，然后加入２０ｍＬ的ＤＭＥＭ培养液中混匀，过滤杂质后以１５００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，离心完后取上层骨髓，加入５ｍＬ制成ＤＭＥＭ培养液制成单细胞悬液（细胞数为１０个／ｍＬ），然后置入容积为３０ｍＬ的培养瓶中，加入１０ｍＬ含２０％新生小牛血清、青霉素１００Ｕ／ｍＬ、硫酸链霉素１００ｇ／ｍＬ的ＤＭＥＭ培养液，再次离心１２００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，去上清，计数。然后置入３７ ℃、５％ＣＯ２培养箱内培养。细胞培养２４ｈ贴壁，呈梭形成纤维样细胞生长，７２ｈ后大量细胞成纤维样生长，部分区域成漩涡样细胞群，见图１。在细胞种植的第４天第１次换液，以后每２ｄ换液１次，细胞生长７～１０ｄ后长满瓶底面积的８０％时２．５％胰蛋白酶收集计数并传代。

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