联系我们

联系人：陈经理

点击查看联系方式

资料下载

白桦脂酸对ＣＣｌ４诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究

详细内容下载：

文件大小：1076kb

上传时间：2019/3/22 14:12:49

文件类型：pdf

上传者：恒远免疫学第三方检测中心

查看次数：327次

下载次数：52次

“上海恒远”产品文献：

白桦脂酸对ＣＣｌ４诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究
徐立新１＊，严丽军１，２

（１．南通市第三人民医院肝病科，江苏南通    ２２６０００；２．南京医科大学第一临床医学院，江苏南京    ２２６０００）
    摘要：目的     研究白桦脂酸（Ｂｅｔｕｌｉｎｉｃａｃｉｄ）对四氯化碳（ＣＣｌ４）诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其相关机制。方法    ５０只ＩＣＲ小鼠随机分为５组：空白对照组、ＣＣｌ４组、ＣＣｌ４＋水飞蓟素组（２００ｍｇ／ｋｇ）、ＣＣｌ４＋白桦脂酸低剂量组（２０ｍｇ／ｋｇ）、ＣＣｌ４＋白桦脂酸高剂量组（４０ｍｇ／ｋｇ）。除空白对照组和ＣＣｌ４组给予等体积蒸馏水外，其余各组每日灌胃给予相应剂量药物，共７ｄ。末次给药２ｈ后，腹腔注射０．１％的ＣＣｌ４植物油溶液（１０ｍＬ／ｋｇ），空白对照组腹腔注射等体积植物油。１８ｈ后取血、肝脏。各组小鼠肝脏做ＨＥ染色，检测血清丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、白介素（ＩＬ－６、ＩＬ－１β）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ?α）水平，并采用蛋白免疫印记法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测肝脏组织中ｐ－ＮＦ?κＢ、ＮＦ?κＢ、ｐ－ＩκＢα、ＩκＢα、Ｎｒｆ－２和ＨＯ－１蛋白表达。结果白桦
脂酸（２０、４０ｍｇ／ｋｇ）能降低ＣＣｌ４诱导的肝损伤小鼠血清ＭＤＡ、ＩＬ－６、ＩＬ－１β和ＴＮＦ?α含量（Ｐ＜０．０１），升高ＳＯＤ含量（Ｐ＜０．０１）；能显著改善小鼠肝脏组织的病理学改变；显著降低肝脏ｐ－ＮＦ?κＢ、ｐ－ＩκＢα蛋白表达（Ｐ＜０．０１），增加肝脏Ｎｒｆ－２和ＨＯ－１蛋白表达（Ｐ＜０．０５～０．０１）。结论     白桦脂酸对ＣＣｌ４诱导的小鼠肝损伤具有保护作用，这种效应可能与Ｎｒｆ－２／ＨＯ－１／ＮＦ?κＢ信号通路有关。
关键词：白桦脂酸；肝损伤；Ｎｒｆ－２／ＨＯ－１／ＮＦ?κＢ
中图号：Ｒ２８５．５
文献标志码：Ａ
文章编号：１６７２－０４８２（２０１７）０６－０６１８－０５
    肝脏是人体最重要的实质性器官之一，它具有强大的代谢和防御功能。当各种外源化学物质或者自身代谢产生的废弃物蓄积到肝脏时，可能会引起肝损伤、肝炎、肝纤维化甚至肝细胞坏死等疾病。这些化学性物质包括四氯化碳（ＣＣｌ４）、酒精、对乙酰氨基酚类感冒药等［１］。因此，肝脏疾病已成为影响人类健康的常见病之一。目前对于肝脏疾病的治疗主要集中于立即停止服用可能造成肝损伤的药物并采用抗炎、抗自由基损伤、保护肝细胞膜、促进肝细胞代谢、促进肝细胞修复和再生、促进胆红素及胆汁酸代谢的药物进行治疗［２］。传统中医药药物资源丰富，许多中草药对于肝脏具有一定的保护作用，采用中医药治疗肝损伤也逐渐为国内外学者所重视。化学性肝损伤动物模型有ＣＣｌ４、Ｄ－氨基半乳糖胺和醋氨酚等，其中ＣＣｌ４是最经典的急性肝损伤模型，重复性好且技术简单。ＣＣｌ４是一种可以迅速被肝脏吸收的细胞毒性物质，它在肝脏内会诱发自由基形成从而导致链式过氧化反应［３］。同时，ＣＣｌ还会引起细胞内环境紊乱，激活大量炎症因子，从而进一步产生氧自由基，加重肝损伤。因此，本实验采用ＣＣｌ４复制肝损伤小鼠模型。
    炎症是一种机体对有害刺激所产生的以防御为主的病理反应，氧化应激是体内氧化与抗氧化系统失衡，是自由基在体内产生的负面作用，会引起中性粒细胞浸润、分泌大量蛋白酶、产生氧化中间产物等。炎症与氧化应激相辅相成，是导致机体衰老和疾病的重要因素。本研究通过检测血清内炎症因子和丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）含量；以及炎症和氧化应激相关蛋白ｐ－ＮＦ?κＢ、ｐ－ＩκＢα 和Ｎｒｆ－２、ＨＯ－１在肝脏组织内的表达，探讨白桦脂酸对ＣＣｌ４诱导的小鼠急性肝损伤的相关机制。
１材料和方法
１．１试验药物
白桦脂酸（纯度：９７％）购自天津万象恒远科技量组（４０ｍｇ／ｋｇ）（Ｈ）。给药组连续灌胃７ｄ，空白对照组和ＣＣｌ４组给予等量蒸馏水。末次给药２ｈ后，腹腔注射０．１％的ＣＣｌ４植物油溶液（１０ｍＬ／ｋｇ），空白对照组腹腔注射等体积植物油。１８ｈ后取血、肝脏。
１．５．２肝脏组织病理学观察小鼠眼眶取血处死后，将肝脏组织固定于４％的中性福尔马林溶液。将组织包埋于石蜡中并切成４ｍｍ厚的切片。去石蜡，用苏木素－伊红染液染色（ＨＥ染色），采用光学显微镜观察肝脏组织病理学改变（×２００）。１．５．３血清ＳＯＤ、ＭＤＡ含量测定    ＣＣｌ４植物油溶液腹腔注射１８ｈ后，小鼠眼眶采血，于４５００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ后取上清液冻存于－８０ ℃备用。按照试剂盒的说明书测定ＣＣｌ４诱导的肝损伤小鼠血清中ＳＯＤ、ＭＤＡ的含量。
１．５．４血清中炎症因子测定ＣＣｌ４植物油溶液腹腔注射１８ｈ后，小鼠眼眶采血，于４５００ｒ／ｍｉｎ离心
１５ｍｉｎ后取上清液冻存于－８０ ℃ 备用。按照— ６２０ —南京中医药大学学报２０１７年１１月第３３卷第６期

ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书检测肝损伤小鼠血清中ＩＬ－
１β、ＩＬ－６、ＴＮＦ?α的含量。
１．５．５相关蛋白含量测定ＣＣｌ４植物油溶液腹腔注射１８ｈ后，处死小鼠并取肝脏组织匀浆，用ＲＩＰＡ裂解液提取总蛋白，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ并收集上清。采用ＢＣＡ试剂盒蛋白定量。蛋白样品置于ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳中直至样品到达底部，并将其转移到ＰＶＤＦ膜上。转膜完毕后，将含有蛋白样品的条带置于５％脱脂牛奶中封闭２ｈ。封闭结束后将ＰＶＤＦ膜置于相应的一抗中４ ℃ 孵育过夜。第２天回收一抗，用ＴＢＳＴ洗４次，每次１０
ｍｉｎ。将ＰＶＤＦ膜置于二抗溶液中于摇床室温孵育
２ｈ。二抗孵育结束后，取出ＰＶＤＦ膜用ＴＢＳＴ清洗
４次，每次１０ｍｉｎ。使用凝胶成像系统曝光并扫描条带分析各条带灰度值。
１．５．６统计学分析所有实验数据以ｘ珚±ｓ表示，运用统计学软件进行单因素方差分析（ｏｎｅ－ｗａｙ
ＡＮＯＶＡ），Ｐ＜０．０５表示差异具有统计学意义。
－－－－－－－－－－－－-了解更多，欢迎点击下载或前来咨询我公司业务员哦，更多产品文献等着您！