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技术文章
该如何去除细胞培养中支原体污染？
点击次数：2661 发布时间：2025/1/23 9:34:41
细胞污染问题概述在生物实验室中，细胞污染是一种较为普遍的现象。轻微的污染可能会使细胞的状态发生改变，进而降低实验结果的可重复性；而严重的污染则可能会直接导致细胞死亡，从而对实验的进度产生不利影响。在本期内容中，我们对支原体污染的常见症状进行了汇总，并且针对不同情况分别给出了相应的应对措施。
一、生物污染相关情况细胞在体外的生存环境可以说是充满了各种潜在的危险因素。空气中存在着大量肉眼难以察觉的微生物，一旦操作不当，细胞就很容易受到感染。除此之外，如果实验操作流程不够规范，还可能会出现细胞交叉污染的情况。
1、支原体污染的具体情况支原体（mycoplasma）是一种没有细胞壁、形态高度多变，并且部分种类可以通过人工培养基进行培养增殖的原核细胞型微生物，其大小约为0.3微米。由于支原体能够形成丝状以及分枝形状，因此得名为支原体。在细胞培养过程中，利用显微镜很难观察到支原体的存在，而它们却会与细胞争夺营养物质，从而影响细胞的正常生长，最终导致实验结果出现偏差。
支原体的培养条件与细胞培养条件有很大的相似性，所以支原体会和细胞共同竞争有限的生存资源。相关研究早已表明，一些常见的支原体（例如人型支原体、发酵支原体、精氨酸支原体等），能够通过精氨酸脱亚胺酶分解精氨酸来获取能量。当这些支原体进入到细胞培养体系中后，就会与细胞争夺精氨酸，使得细胞出现营养不良的症状，如生长速率出现异常、活力下降、容易从培养基表面脱落等。而精氨酸又是细胞组蛋白的重要组成部分，细胞如果缺乏精氨酸，会严重影响组蛋白的合成，进而导致染色体发生断裂。再加上细胞处于饥饿状态，最终会导致细胞生长速度变慢甚至死亡。
支原体可以通过黏附作用与细胞结合在一起，获取细胞膜表面的脂质和胆固醇，从而破坏细胞膜的完整性，并且影响细胞之间的信号传递。支原体会趁机侵入细胞内部，使得细胞中核酸内切酶的含量增加，导致细胞染色体出现异常进而死亡。经过支原体的这一系列作用后，细胞结构会受到严重破坏，随之而来的就是细胞形态发生改变、细胞容易聚集在一起、由于大面积细胞凋亡而产生的蛋白碎片（也就是培养基中的碎片和小黑点）。
在正常情况下，随着细胞的生长和代谢，培养基中的营养成分会逐渐被消耗掉，细胞代谢产生的废物会逐渐积累，培养基的上清液会逐渐变成黄色，因此需要定期更换培养基。支原体也是一样，当培养体系中感染了支原体并且它们大量繁殖时，会向外排放代谢产物，从而影响体系中的pH值，加快培养基变黄的速度。
综合上述情况，如果你所培养的细胞出现了以下情况，基本可以确定是支原体感染了，可以配合支原体检测试剂盒（Venor Gem OneStep，货号：11-8025）进行进一步的确认。
支原体污染后的处理方法如果细胞被支原体污染，应该根据细胞的具体情况采取不同的处理措施。对于那些重要程度相对较低的细胞，由于祛除支原体的难度较高，因此，建议直接将这类被污染的培养物丢弃。 对于无法培养的珍贵样本或者病毒收获液，可以使用德国MB公司的Mynox?（货号：10-0200）进行处理。该产品含有从枯草杆菌中提取的成分，能够特异性地与支原体膜结合，改变支原体膜的通透性，从而使支原体在2 - 3小时内破溃死亡。
如果细胞是可以培养超过一个月的，那么可以使用德国MB公司的Mynox? Gold（货号：10-0201），通过直接杀除支原体以及巩固防护的两步处理方式，不仅能够祛除支原体，还可以在后续的培养过程中进一步巩固清除效果，有效防止支原体再次污染。
对于已经发生支原体污染但又不想丢弃，希望继续培养的细胞，例如已经转染或者大量扩增的细胞等情况，可以采用含有复合抗生素成分的产品，这种成分能够抑制支原体蛋白和DNA的合成，同时也对细菌和真菌有一定的抑制作用。首先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法”对细胞进行处理，然后再使用添加了Zell Shield?（货号：13-0050）的培养基来培养细胞，能够达到更好的祛除支原体的效果。
与此同时，还需要对细胞间进行的消杀处理。使用专业的支原体祛除试剂，会更加高效、安全和便捷。对于实验空间中的墙壁、实验台、桌椅板凳、显微镜、冰箱、离心机等设备和仪器，可以使用Mycoplasma-off?或者Mycoplasma-off? Wipes对其进行喷涂或者擦拭，以清除表面的多种微生物污染。对于水浴锅、培养箱水槽等环境，可以选择使用Water Shield?进行处理。按照产品说明将产品按比例直接加入水浴锅或培养箱水槽中，可以起到预防微生物污染的作用。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
