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技术文章
盘点核酸法检测支原体的具体方法
点击次数：4507 发布时间：2023/4/10 15:48:47
核酸法检测支原体的有点显而易见：便捷、高效、准确率高、灵敏度高。核酸法分为普通PCR法和qPCR法。这两种方法各有优缺点，也各有适应场景。
常规法PCR检测试剂盒——Venor®GeM Classic
该试剂盒可以通过常规 PCR 对研究和工业中的细胞培养上清液、培养基和生物制药中的支原体污染进行快速、可靠和省时的常规监测。
细胞培养物和培养基成分中的支原体（柔膜菌纲：支原体、无胆原体、螺旋体）物种都是通过高度保守的 rRNA 操纵子扩增来特异性检测的，或者更具体地说，通过扩增支原体基因组中的 16S rRNA 编码区来特异性检测。在265-278 bp处检测到支原体特异性扩增。通过使用提供的内扩增对照（在191 bp处检测到），可以排除由于PCR抑制剂或DNA提取不当引起的假阴性结果。
优点：便捷成本低
缺点：无法定量
qPCR检测试剂盒——Venor®GeM qEP
支原体荧光定量PCR法（qPCR）：是在常规PCR基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使PCR扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行DNA扩增反应的实时监测，简称qPCR。
优点：灵敏度高、特异性强、时间短，2-3小时出结果，检测结果可定量，操作简便
缺点：
对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体DNA仍旧存在其中，PCR结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）
不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在专业人员推荐指导下使用。
『支原体qPCR检测试剂盒』介绍
德国MB公司生产的支原体qPCR检测试剂盒（均为探针法检测），依据操作步骤的细微差别， 分『经典法』和『一步法』两种。
此两类试剂盒较全球其他厂家同类产品，具有以下独特的优点：
①经典法qPCR试剂盒遵循欧洲药典流程要求
②高特异性，一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。操作简单，易于观察（使用MB的试剂盒，下表中列出的支原体物种均为阳性，其他微生物或真核细胞均为阴性，无交叉反应）。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
