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技术文章
什么时候应检测支原体
点击次数：4089 发布时间：2020/6/29 16:32:50
支原体污染不仅是细胞培养中需要克服的现象，而且是制药、生物制品生产中需要加以避免的。
图：电镜下的支原体
对于药品和生物制品，出厂前基本都需要做支原体检验。在这方面，《中国药典》有详细的规定。有些兽用疫苗出厂前也需要做支原体检验，可参考《中国兽药典》。
对于细胞培养的实验室，建议应定期进行支原体污染存在与否的常规监测。原因有四：
1、支原体污染肉眼不易分辨。支原体只有电镜下才能观察到，早期的支原体感染没有很明显的特征。
2、细胞极易发生支原体污染。据国际对多个研究机构的实验室调查显示，细胞培养时，支原体污染的发生率平均在60%以上。常规抗生素无法抑制支原体。支原体可来自环境、人的口腔、鼻咽、胰酶或者培养基。细胞间内有一瓶细胞污染，其支原体极易通过气溶胶造成传播。
3、支原体对实验干扰大。支原体可造成细胞的染色体断裂和蛋白表达谱变化，争夺细胞的营养，使实验数据的可信度下降。
4、支原体检测较为方便。现在吸取200ml细胞培养上清，采用PCR的方法，只需不到3个小时即可出结果。
建议选用特异性强、灵敏度高、检测支原体种类较多、省时省力的专用PCR试剂盒，比如德国Minerva公司出品、罗伯特·科赫研究所监制的，其有检测试剂盒共有四款（其中一款为荧光定量法）可加以选用，其中两款适合工业用户，已通过欧洲药典认证。其支原体检测的配套产品也很丰富，例如支原体DNA提取试剂盒（非必选），支原体标准品等，
也许有人会说，我培养的细胞一直都长的很好，形态正常，或者说，我已经用了预防支原体的产品，我不需要作支原体检测。但如果细胞长得不好，也没有用支原体预防剂或者有如下情况时，则强烈建议进行支原体检测。
1、实验室里带进来新细胞。新细胞是支原体污染的主要来源。在新细胞作任何用途之前，有必要隔离细胞，并检查是否有支原体污染。
2、实验室里最近发生过支原体污染。
3、细胞将要冻存之前，建议进行支原体检测。因为支原体的存在，会导致液氮罐中支原体污染的传播。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
