除了基质匹配对照实验和吸附饱和对照，还有哪些方法可以判断样本里的干扰

组分是否会直接干扰 ELISA 的吸附？

可以做梯度稀释回收实验，把同一个高浓度纯化目标抗原分成两份，一份用缓冲液梯度稀释，另一份用待测基质做相同梯度稀释，两套稀释系列同步上板包被，后续流程完全一致。对比两条曲线的平台区高度，如果基质稀释组的平台显著低于缓冲液组，就说明基质组分竞争板面位点，降低了目标物的最大吸附载量，属于吸附层面的干扰。如果两条曲线平台高度一致，只是基线抬高，说明只是基质成分带来非特异背景，没有抢占吸附位点。这个方法的优势是贴近常规 ELISA 操作，不需要额外标记蛋白，自建体系里很容易实施。

可以做板面残留检测实验，只在孔内加入待测基质进行孵育和洗涤，之后不再添加任何抗原抗体，直接用通用蛋白显色试剂检测孔壁上结合的蛋白总量，比如 BCA 显色。如果基质孵育孔的读数明显高于缓冲液空白，证明基质中的蛋白组分可以稳定吸附在固相表面，存在位点竞争的潜力。如果读数和缓冲液空白接近，说明基质组分基本不吸附板面，不会产生吸附竞争干扰。该方法适合快速初筛，但是不能区分吸附上去的是疏水结合还是电荷结合，只能证明有没有组分挂板。

可以做板条结合力平行比对试验，同一套样本和目标物，同时使用高结合力板条与中结合力板条开展实验。如果在高结合力板上信号被明显压低、平台上不去，换到中结合力板之后最大吸附信号恢复正常，提示干扰主要来自带电组分的静电竞争吸附。如果两种板条上最大载量都同步下降，说明干扰物质以疏水竞争吸附为主。如果只是空白在高结合板更高、最大信号不受影响，就不属于吸附竞争，只是非特异结合抬升背景。

可以做基质预处理去除试验，把基质分别经过蛋白沉淀、超速离心、亲和去除白蛋白或者脂蛋白处理，再和未处理基质做对照包被。处理之后最大吸附信号回升，说明被去掉的那一类组分就是竞争吸附的来源。比如脂血样本脱脂之后平台信号恢复，代表脂蛋白在抢占疏水吸附位点；去除高丰度白蛋白之后信号恢复，代表白蛋白是主要竞争物。这个方法还能同时定位是哪一类物质造成吸附干扰。

可以做孵育时序调换试验，一组先包被目标蛋白，洗板后再加基质孵育；另一组先加基质孵育、洗板后再加目标蛋白包被。只有后一组信号下降，才是基质组分预先占据板面位点的吸附干扰。如果两组信号都下降，说明干扰发生在抗原抗体识别或者蛋白变性层面，不是固相吸附竞争。这个时序对照可以把固相吸附干扰和后续免疫反应干扰快速分开。

还有一个参考方式，就是观察包被缓冲液 pH 漂移试验。基质加入包被体系之后如果明显改变体系 pH，会改变蛋白和板面的带电状态，间接影响吸附能力。测定加入基质后的实际 pH，和标准包被 pH 对比，pH 偏移较大时，即使没有大量杂蛋白，也会改变目标分子的吸附效率，这属于间接的吸附干扰，区别于位点抢占式吸附干扰。

这些方法都要注意和免疫干扰区分开，吸附干扰核心特征是会压低饱和平台信号，而单纯异嗜性抗体、补体干扰一般只会抬高空白，不会降低饱和载量。色素、浊度造成的读板干扰，洗涤之后固相没有额外结合物，不属于吸附干扰。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司