如何判断样本里的干扰组分是否会直接干扰 ELISA 的吸附？

可以用基质匹配对照实验来判断干扰组分会不会直接干扰板面对蛋白的吸附，核心思路就是看基质存在与否会不会改变蛋白在固相板面的吸附量，区分是影响抗原抗体结合，还是直接影响固相吸附。准备两组，一组只用缓冲液稀释已知量的纯化标记蛋白或者纯化抗体，另一组用待测基质稀释同等量的这个蛋白，其他包被孵育洗涤条件完全一致，孵育结束后检测固相上留存的信号。如果基质组信号明显低于缓冲液组，就说明基质里的组分抢占板面吸附位点，直接抑制蛋白吸附；如果基质组空白本身很高，但加入蛋白后的信号差值和缓冲液组差别不大，说明主要是非特异吸附抬高本底，而不是阻碍目标物吸附。

也可以做吸附饱和对照，在板面先加入基质孵育，充分洗涤之后再加入纯化目标蛋白，和没有提前加基质的对照组对比信号。提前孵育基质组信号下降，代表基质组分吸附到板表面，占据了结合位点，后续目标蛋白很难挂上板，属于吸附层面的干扰。如果预处理基质之后信号没有明显变化，说明基质组分不会和板面发生吸附竞争，干扰大概率发生在抗原抗体识别、显色环节，和板条吸附无关。

还要结合板条结合力类型辅助判断，高结合力板带有较多电荷，基质里带电荷丰富的蛋白、多糖、核酸更容易吸附在板面抢占位点，中结合力板以疏水吸附为主，脂类、疏水蛋白更容易发生竞争吸附。溶血样本里的血红蛋白、脂血里的脂蛋白、组织匀浆里大量杂蛋白都容易产生位点竞争，这类组分就是典型可以干扰固相吸附的物质。

需要和别的干扰做区分，吸附干扰的特点是同等目标物投料，固相捕获总量下降，最大信号上不去；而异嗜性抗体、补体这类干扰，往往是造成额外的结合、背景升高，不会压低最高点的信号，更多是干扰免疫反应而不是固相吸附。单纯色素带来的吸光度干扰，只是读数偏高，洗涤之后固相上并没有更多蛋白吸附，不属于吸附干扰。

另外还有简单的辅助观察，基质加入之后孵育，洗板之后孔壁肉眼可见一层薄膜或者浑浊沉淀，一般代表有大量基质组分留在板面，存在吸附干扰的风险，这种样本优先做基质稀释或者前处理，也可以更换中结合力板条来减轻竞争吸附。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司