1. 贴壁细胞的消化:

a) 吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。

b) 加入少量胰蛋白酶消化液,盖过细胞即可,室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

c) 显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。

d) 如果发现消化不足,可加入胰蛋白酶消化液重新消化。

e) 如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的wan全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。

2. 组织的消化:

不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
细胞的培养采用公司利产品大鼠小梁网细胞培养试剂盒(RatEyePrimaCell：NormalTrabecularMeshworkCellsCatNo.3-7526)来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞（如脂肪细胞、纤维细胞等）的污染，同时bao证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下，大鼠小梁网细胞传5代仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。