细胞培养(Ce11culture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来,广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等域,发展成一种重要生物技术,并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短,性状与体内相似,适用于研究。一般说来,幼稚状态的组织和细胞,如:动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。
小鼠原代细胞的分离及细胞计数操作:
1、取材
用颈椎脱位法使小鼠迅速死亡。然后,把整个动物浸入盛有75,乙醇的烧杯中数钟消毒,取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒的剪刀剪开用乙醇再次消毒后的皮肤,剖腹取出内脏器官或组织。置于无菌平皿中。
2、切割
用灭菌的PBS液将取出的脏器或组织清洗三次,然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎,直到成1m左右的小块,再用PBS清洗,洗到组织块发白为止。移入无菌离心管中,静置数分钟,使组织块自然沉淀到管底,弃去上清。
3、消化
吸取0.25,胰蛋白酶--0.02,EDTA混合消化液1ml,加入离心管中,与组织块混匀后,加上管口塞子,37℃水浴中消化30分钟,每隔5分钟摇动一下试管,使组织与消化液充分接触,静止,吸去上清。
4、制备单细胞悬液
向含有经消化的器官或组织的离心管中加入2-3ml含10%小牛血清的DWEM培养基,用吸管吸打数次,直到看不到块状组织。
小鼠原代细胞
https://www.chem17.com/st474326/product_35871274.html
http://www.sunn-cell.com/SonList-2243580.html

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