手工洗板的具体操作步骤是什么？

ELISA 手工洗板详细操作步骤

准备工作

洗液（0.05% Tween-20 的 PBS 或 TBS）提前回至室温，混匀，无结晶；准备废液缸、干净吸水纸、多道移液枪；确认酶标板孵育完成。

操作步骤

加洗液用排枪向每孔加入洗液，加满（约 300μL），液体完全覆盖孔底包被层，加液沿孔壁缓慢打入，不要直冲孔底，避免冲掉固相上结合的免疫复合物。

浸泡加完全板洗液后，室温静置浸泡 30～60 秒。浸泡是关键，让非特异性吸附的蛋白充分解吸。

弃液甩板捏住酶标板两侧，快速将板倒扣，用力一次性把孔内液体甩进废液缸，动作干脆，不要来回摇晃板子。

拍板除残液甩干后，保持板孔朝下，将板口轻贴吸水纸上轻拍 2～3 下，只吸去孔口悬挂的液滴。

重点：不能用力按压板底，不要让吸水纸伸进孔内，防止纤维掉入孔中造成斑点背景。拍板后及时更换吸水纸。

重复洗涤循环重复【加洗液→浸泡→甩液→轻拍】整套流程，常规 ELISA 洗涤 3～5 次；间接 ELISA 背景偏高，可洗 4～5 次。

下一步操作一次拍板完成后，立刻加入下一反应试剂，绝对不能让孔长时间干燥。孔一旦风干，蛋白会不可逆吸附，本底升高或信号下降。

手工洗板核心注意事项

甩板力度尽量保持一致，每一次甩板动作统一，减少孔间 CV。

洗液要足量，不要只加少量液体，无法充分浸泡洗脱非特异蛋白。

吸水纸要干净，潮湿、有碎屑的吸水纸不能继续使用。

避免孔之间液体交叉流淌造成孔间污染。

浸泡时间不要随意缩短，只甩不浸泡会导致背景偏高。