细胞培养基中加入的双抗多了或者少了会有什么影响？

双抗也就是青霉素‑链霉素，常规工作终浓度是青霉素 100 U 每毫升，链霉素 100 μg 每毫升，商品化的 100 倍储存液按照培养基体积百分之一添加即可，它仅对细菌发挥作用，无法抑制真菌和支原体。

双抗加少的时候，抑菌效果就会下降，细菌只能被部分抑制而不能杀灭，容易形成隐性的亚致死污染。培养基不一定会出现浑浊变黄，镜下也不一定马上看到大量细菌，但是细胞生长速度会变慢，细胞碎片有所增加。这种潜伏的细菌污染会随着传代慢慢爆发，更严重的是会造成后续各类细胞功能实验重复性变差。低浓度双抗本身几乎不会对细胞产生毒性，所有风险主要来源于污染隐患，同时即使提高一点用量，依旧不能抵御支原体或者霉菌污染。

双抗加多之后抑菌能力虽然提升，但会带来对动物细胞的毒性损伤。青霉素过量毒性相对温和，主要毒性来自链霉素。链霉素可以作用于细胞的线粒体核糖体，干扰线粒体内部蛋白质的合成。短期高浓度处理之后，细胞增殖速度下降，贴壁细胞贴牢的能力减弱，漂浮死细胞变多，镜下细胞质颗粒增多，细胞形态皱缩。长期在偏高的双抗环境培养，细胞凋亡水平上升。原代细胞以及干细胞对此更加敏感，还会影响细胞的分化能力，转染效率也随之降低。高浓度双抗并不会瞬间杀死全部细胞，属于慢性的抑制损伤，很容易被误判为细胞本身状态不好。持续的抗生素压力还会带来实验数据的系统性偏移，凋亡、信号通路相关的实验结果可信度下降。

实际细胞培养当中，普通细胞系日常维持使用标准一倍浓度的双抗就足够，千万不要试图通过加高双抗挽救已经发生污染的细胞，污染的细胞应当直接丢弃。原代细胞培养，还有转染、凋亡以及信号通路研究的功能实验，尽量减少或者直接不使用双抗，依靠严格的无菌操作来控制污染，避免抗生素对线粒体带来的干扰。只有刚复苏冻存细胞或是刚完成组织取材做原代分离的初期，可以短暂使用一点一点五到两倍浓度的双抗临时防护，细胞状态稳定之后就要换回标准浓度或者直接去除。总的来说双抗只能作为辅助防护手段，永远不能代替无菌操作。