跑蛋白的时候需要知道目的蛋白的分子量，如何查询目的蛋白的分子量呢？

查到的均为理论分子量，SDS-PAGE 实际条带位置会受蛋白修饰、构象影响，不一定完全对应。

一、数据库查询（优先）

1. Uniprot（，信息最全）

操作：

搜索框输入基因名 / 蛋白名，同时写上物种（人、小鼠等）

打开对应条目，找到 Sequence 板块

查看 Mass 数值，单位 Da，除以 1000 得到 kDa（WB 单位）
额外可查看：信号肽、蛋白异构体信息，不同异构体分子量不同，务必确认你检测的亚型。

2. NCBI Protein

操作：

输入蛋白 / 基因名称 + 物种

打开目标蛋白页面，直接查看 Molecular weight；也可复制氨基酸序列备用。

3. Ensembl

适合查找同一基因不同剪接变体，对比不同转录本翻译出的蛋白长度。

二、已知氨基酸序列，在线工具计算

ExPASy 的 ProtParam 工具：粘贴氨基酸序列提交，直接输出理论分子量。

计算结果不含糖基化等翻译后修饰；存在信号肽的蛋白，要删除信号肽序列再计算成熟蛋白分子量。

三、WB 实验常见注意点

异构体：同一基因多个转录本，蛋白长度差异大，检索时核对 isoｆorm 编号，避免选错。

翻译后修饰：糖基化蛋白电泳条带常明显大于理论分子量；磷酸化只会小幅改变迁移位置。

重组蛋白标签：质粒表达带有标签时，记得叠加标签分子量

His-tag 约 0.8 kDa

GST 约 26 kDa

MBP 约 42 kDa

SDS-PAGE 迁移偏差：大蛋白、疏水膜蛋白，条带位置和理论分子量出现偏差属于正常情况。

四、快速示例

人源 GAPDH，Uniprot 编号 P04406，理论分子量 36.1 kDa。