明胶酶谱法检测试剂盒检测原理及使用步骤！_技术交流_仪器仪表技术文献

明胶酶谱法检测试剂盒检测原理及使用步骤！

提供者：南京信帆生物技术有限公司发布时间：2022/2/28 13:43:37 阅读次数：3792次进入该公司店铺

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明胶酶谱法检测试剂盒检测原理及使用步骤！
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程，其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。
检测原理：
本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次小胶检测，如果小胶加样孔为10~15个，则总计可检测500~750个样品。
染色步骤：
1. 此染色液即为工作液，使用时直接将聚丙烯酰胺凝胶放在培养皿中以考马斯亮蓝染色液覆盖凝
胶，并缓慢摇动2h；
2. 倾去染色液，用脱色液冲洗凝胶；
3. 以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动2h，倾去脱色液，再加入新脱色液进行脱色，直至获得清晰的蓝色的条带和干净的背景（通常此过程需要2～4h，也可脱色过夜至清晰的蓝色的条带和干净的背景）；
4. 对凝胶进行分析和照相，凝胶可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝胶干胶装置（P2000）对
凝胶进行处理后保存。