原理

溶菌酶在281nm诚处有最大吸收峰。溶菌酶标准品用每升溶教含9g氯化钠的溶液溶解并稀释成不同梯度浓度,在28np波长处测定吸光度并绘制标准曲线,求出标准曲线回归方程。试样经过处理,按溶菌酶标准品测定为法测定试样中的吸光度,根据其吸光度值棚标准曲线回归方程计算试样中溶菌酶含量。

方法依据GB/T 25879—2010

仪器及试剂

美析UV-1700紫外可见分光光度计(波长范围190nm~900nm,波长确定性士0.3nm,波长重复精度±0.1nm)。

电子分析天平(感量0.1 mg.1mg)。

离心机(最大离心力2325g,具10 ml离心管)。

溶菌酶标准品,优级纯,活力在20 0o0U/mg左右。

氯化钠,分析纯。

蒸馏水,按GB/T 6682执行。

医用脱脂纱布。

0.9%氯化钠溶液:称取氯化钠(4.3.2)0.9 g,溶解于蒸馏水中,定容至100mL。

溶菌酶标准工作液:称取溶菌酶标准品0.500g,以 0.9%氯化钠溶液溶解定容至1000 mL,得到500ug/mL 的溶菌酶标准工作液，于4℃密封保存备用,1周内使用。

分析步骤

标准曲线的绘制

分别吸取溶菌酶标准工作液1mL,2 mL,3 ml,4 mL,5mL于25 mL 容量瓶中,以0.9%氯化钠溶液稀释至刻度,混匀。用10mm石英比色皿比色,以0.9%氯化钠溶液为参比溶液,在波长281 nm处依次测定各标准工作液的吸光度﹐以溶菌酶标准工作液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,并求出标准曲线回归方程。

试样测定

鸡蛋蛋清用4层纱布过滤,取过滤试样l mL,用0.9%氯化钠溶液稀释定容至100 mL,混匀,避免起泡沫。吸取5mL蛋清的氯化钠溶液,1 310g离心5min,取上清液,按照绘制标准曲线的操作步骤,在波长281nm处测定试样溶液的吸光度。平行测定三次,取结果的算术平均值,由标准曲线回归方程计算试样溶液中溶菌酶的浓度。

结果的计算

根据试样溶液吸光度值,用标准曲线回归方程计算试样溶液中溶菌酶的浓度c。鸡蛋蛋清中溶菌酶的含量按式计算:

式中:

X—鸡蛋蛋清中溶菌酶的含量,单位为微克每毫升(ug/mL);

c——试样溶液中溶菌酶的浓度,单位为微克每毫升(ug/mL);

V——试样溶液定容的体积,单位为毫升(mL);

V₁——试样的体积,单位为毫升(mL)。

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