组织样本在清洗时，需要注意哪些细节?

清洗的核心目标只去除表面游离血液、血凝块、组织渗出液，血管内固有血液无法也不需要完全洗干净，严禁为追求 “肉眼发白” 长时间浸泡，避免可溶性蛋白流失、蛋白降解、修饰位点丢失。

首先是 PBS 本身的选择，优先选用无钙、无镁离子的预冷 PBS，4℃。含钙镁的 PBS 容易促使血块凝固黏在组织表面，很难漂洗去除。不要直接用生理盐水替代，生理盐水缺少缓冲能力，离体组织 pH 容易偏移，加速蛋白降解。PBS 不需要提前加蛋白酶抑制剂做漂洗液，抑制剂留在裂解液里添加即可；漂洗时加入抑制剂，一方面成本高，另一方面抑制剂会残留在组织表面带入后续裂解体系，部分成分会干扰质谱。

温度全程保持低温，PBS 提前放 4℃预冷，操作台面冰盒，组织离体后尽快漂洗，不要室温放置等待。离体后组织内源蛋白酶很快激活，室温下哪怕几分钟就会发生蛋白降解，磷酸化、泛素化这类翻译后修饰样本对温度更加敏感。

漂洗操作方式，不要浸泡，采用快速涮洗。组织剪下之后，先用无菌剪刀修剪掉肉眼可见血凝块、坏死组织，血凝块依靠漂洗很难洗干净，优先修剪去除。放入 PBS 中快速涮 1‑3 秒就取出，不要泡在 PBS 中等待处理，浸泡会造成胞质可溶性蛋白渗漏，后续蛋白得率下降，定量出现偏差。大块组织可以剪为小块再漂洗，增大表面接触，但切块后依旧不能浸泡。

漂洗完成之后的吸干步骤非常关键，使用无尘滤纸或者吸水滤纸轻压吸干组织表面液体，不是擦拭揉搓。要把表面游离 PBS 充分去除，残留的 PBS 带入后续裂解管，会稀释裂解液，降低 SDS 或者尿素的有效浓度，改变盐浓度，直接影响裂解效率。不能带游离液体直接冻存或者裂解。

区分不同组织的差异化处理。血液丰富的组织，脾脏、肝脏、血管瘤类组织，不要反复多次漂洗，这类组织内部本身就含有大量血液组分，过度清洗会把组织固有的蛋白洗掉，只去除表面游离血水即可。脂肪含量高的组织，表面油脂多，漂洗之后注意吸除油脂；微量穿刺小组织样本，组织量很少，不建议反复漂洗，可以只用滤纸吸去表面血迹，减少组织损耗。

样本处理时间控制，取材、修剪、漂洗、吸干，整套流程尽量快速完成，普通总蛋白组控制在几分钟内结束；修饰组样本需要进一步压缩时间，减少离体后酶激活造成修饰位点丢失。漂洗完成后，二选一，要么立刻液氮速冻，要么直接冰上裂解，禁止漂洗后放在冰上 PBS 缓冲液中静置等待批量处理。

需要避开的常见误区，，反复多次漂洗、长时间浸泡，追求组织发白，造成可溶性蛋白流失。第二，使用含钙镁 PBS，血块洗不掉。第三，漂洗后不吸干，带大量 PBS 进入裂解体系。第四，室温环境下漂洗，造成蛋白降解。第五，指望 PBS 泡散血凝块，不做修剪。第六，肉眼看到组织内部血管发红就认为没洗干净，内部泛红属于正常现象，只需要清除表面游离血液。

质控层面的小细节，同批次样本漂洗条件要完全统一，漂洗次数、浸泡时间、PBS 温度保持一致，减少操作带来的技术差异。可以随机抽取部分样本，收集一遍漂洗液，观察颜色，或者做 BCA，判断是否出现大量蛋白渗漏。肉眼仅作为现场初筛，最终血浆污染情况靠电泳、WB 或者后续质谱数据判断。

论文方法描述建议写清楚：使用 4℃预冷无钙镁 PBS 快速漂洗去除表面游离血液，修剪去除血凝块，不进行长时间浸泡，滤纸吸干表面残留液体，避免模糊描述 “PBS 清洗至干净”。