大鼠抗凝血酶（AT)ELISA试剂盒一步法
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产品名称：大鼠抗凝血酶（AT)elisa试剂盒一步法

货号;RF11003

规格;48孔/96孔

保质期;6个月

保存;2-8度

检测波长：450nm

简介：

大鼠抗凝血酶（AT)ELISA试剂盒一步法公司的每一个ELISA试剂盒，在出厂前均经质检部对其进行严格的品质鉴定，严把质量关。公司系列ELISA试剂盒产品丰富，并将不断推出新产品，满足广大科研工作者的需要

详细介绍

大鼠抗凝血酶（AT)ELISA试剂盒一步法注意事项:
}1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
}2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
}3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
}4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第1孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
}5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
}6．底物请避光保存。
}7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
}8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
}9．本试剂不同批号组分不得混用。
}10．如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

细胞处理方法如下：

贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集） ；

2）将收集到的细胞用冷PBS 洗3次；

3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融） ：

⇒ 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂；

⇒ 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 度以下冰冻，室温融解，反复3次，使细胞溶胀破碎；

4）将标本于2-8 度 1500×g 离心 10 分钟，收集上清备用。

样品前处理：

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的ELISA、Western和免疫沉淀等操作