细胞培养过程中，如何判断细胞是否受到污染？

结合肉眼观察、显微镜镜检、辅助判断，按细菌、真菌、支原体三类常见污染分别说明，同时区分正常细胞代谢物与污染，方便实操判断。

一、初步肉眼观察（培养瓶 / 培养板，无需开盖）

培养基状态

正常培养基清亮透明，颜色稳定（常规 pH 7.2–7.4 为橙红色）。

若短时间内（几小时～1 天）整体变浑浊、呈雾状、悬浮大量细小微粒，基本为细菌污染；若出现白色、黄色、绿色絮状团块、菌丝样漂浮物，是真菌 / 霉菌污染。

仅局部轻微浑浊、颜色缓慢变黄，多为细胞代谢产酸，不属于污染。

液面与瓶壁附着物

液面出现薄膜、絮状物，瓶壁附着绒毛状菌落，大概率真菌污染；液面布满细小游动颗粒，多为细菌污染。

二、显微镜下镜检（核心判断手段）

1. 细菌污染

低倍镜下：视野里遍布大量点状、短杆状微小颗粒，数量极多，培养基背景脏乱。

高倍镜下：可见形态规则的球菌、杆菌，多数会自主游动、布朗运动明显。

伴随表现：细胞逐渐皱缩、死亡、碎片增多，细胞基本停止增殖，培养基快速变黄、浑浊。

高发时段：复苏后、传代后 1~2 天即可显现，扩散速度快。

2. 真菌 / 霉菌污染

低倍镜下：能看到丝状、树枝状、棉絮状菌丝，还有圆形或椭圆形孢子，可连成网状、团状。

菌丝会不断延伸，慢慢覆盖细胞层，孢子易脱落扩散到整个培养体系。

伴随表现：细胞慢慢凋亡，培养基一般不会快速浑浊，但会出现异色菌落，污染发展比细菌慢，通常 3~5 天明显加重。

3. 支原体污染（最难识别，隐性危害最大）

肉眼、低倍镜几乎看不出浑浊，极易漏检，属于隐性污染。

镜下特征：细胞间隙、细胞膜表面出现大量细小沙粒状黑点，做缓慢布朗运动，无明显菌体形态、无菌丝。

细胞异常表现：细胞形态怪异、胞内空泡增多、生长速度明显变慢、传代后难以恢复状态，部分细胞贴壁能力下降。

典型特点：可长期共存，不会短期内让细胞全部死亡，但持续影响细胞增殖、分化及实验结果。

三、区分 “正常杂质” 与 “污染”，避免误判

细胞碎片、凋亡小体：形态大小不一、无运动性，零散分布，不会持续增多、扩散，属于细胞正常代谢产物，不是污染。

血清蛋白沉淀：细小均匀白点，静置后会慢慢沉降，无游动、无增殖，更换培养基后会减少，低温保存的血清更易出现，无需处理。

结晶盐颗粒：培养基成分析出，棱角分明、固定不动，多出现在瓶壁或液面边缘，和微生物形态完全不同。

四、补充辅助判断小方法

空白对照验证：准备一瓶同批次、同配方的新鲜培养基，不放细胞，同条件培养。若空白培养基也变浑、长菌，说明试剂、环境带菌；仅细胞组出现问题，多为操作或细胞本身带污染。

传代追踪：污染会随传代不断扩散，同一批次后续孔 / 瓶陆续出现相同异常；单纯细胞状态差不会交叉传染。

五、简单处置原则

细菌、真菌污染：立即整瓶丢弃，密封后按医疗废物处理，同时消毒超净台、培养箱，防止交叉污染。

支原体污染：普通抗生素难以，珍贵细胞可尝试专用支原体清除试剂；常规实验细胞建议直接舍弃，避免污染整批细胞。