活性氧检测试剂盒（ReactiveOxygenSpeciesAssayKit）是一种利用荧光探针H2DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。H2DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。根据活细胞中荧光的产生，可以判断细胞活性氧的含量和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典的组织或活细胞中活性氧检测方法。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物，浓度为50mg/mL。Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。
本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。本试剂盒可以测定1000个样品1000T(96孔板)。
注意事项：
1.探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
2.阳性对照Rosup一般使用浓度为100μM（推荐浓度100-400μM，具体依细胞类型而定）。通常刺激后0.5-4h可观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30min内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
3.对于某些特别的细胞，实验过程中如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:5000稀释DCFH-DA，使DCFH-DA的终浓度为2-5μM。探针装载的时间也可以根据情况在15-60min内适当进行调整。
4.活性氧阳性对照(Rosup)仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。
5.探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱请参考上图。
活性氧检测试剂盒
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