埃泽思生物|干细胞（ES/iPS）冻存专用液：冻存和复苏方法详解

干细胞（包括胚胎干细胞ES和诱导干细胞iPS）是再生医学、疾病建模和药物筛选研究的重要工具。然而，这些细胞的冻存与复苏过程充满挑战——不恰当的冻存方法可能导致细胞活性骤降、分化率升高，甚至珍贵细胞系的丢失。

作为细胞治疗全流程原料生产商，埃泽思Applied cell特别推出无血清细胞冻存液，专为ES/iPS细胞优化设计。本文将详细介绍使用该产品进行干细胞冻存与复苏的专业方法，帮助您提升细胞保存效率。

为什么干细胞冻存如此特殊？

干细胞的冻存不仅仅是“降温保存”那么简单。它们对温度变化、渗透压波动和冰晶形成极为敏感。传统含血清冻存液中的动物源性成分不仅存在批间差风险，还可能引入外源因子，影响细胞性能和后续应用。

埃泽思无血清细胞冻存液采用化学成分明确的配方，不含动物源性成分，确保了稳定性和一致性，同时减少分化风险，显著提高复苏后细胞活率与性维持。

干细胞的冻存方法（逐步指南）

准备工作

1、细胞状态确认：确保冻存前细胞处于对数生长期，形态良好，集落边界清晰

2、试剂准备：埃泽思无血清细胞冻存液提前从4℃取出，室温平衡

3、材料准备：预冷冻存管、细胞刮刀或温和解离试剂

冻存步骤

1. 准备对数期生长的干细胞，加入人干细胞消化液（AC-1001008）消化 3~5 min，用 2mL

人干细胞培养基（AC-1001000）制备成细胞悬液；

2. 1200 rpm 3min 离心，弃上清，用 1.5-2mL ES/iPS 细胞冻存液重悬细胞，细胞密度 1×106~1×107/mL；

3. 转移至冻存管中，无需程序降温，直接将待冻存细胞置于 -80℃过夜，后转移至液氮中长期保存，冻存时注意直立放置冻存管；

复苏：唤醒沉睡的干细胞

复苏过程对细胞造成的热应激和渗透应激同样不容忽视。以下是使用埃泽思无血清冻存液冻存的细胞的复苏指南：

复苏步骤

第1步：快速解冻

从液氮中取出冻存管，立即置于37℃水浴，轻轻摇动直至完全解冻（约1-2分钟）

注意：避免水浴污染管口区域

第2步：稀释与离心

将细胞悬液缓慢滴入5-10倍体积的预温培养基中，轻柔混匀

300g离心5分钟，去除含冻存液的上清

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第3步：重悬与接种

用完全培养基重悬细胞，接种至基质胶包被的培养皿

复苏后24小时内可添加10μM Y-27632（ROCK抑制剂）减少凋亡

第4步：复苏后监测

24小时后观察细胞贴壁情况

48小时后换液，去除未贴壁细胞

常见问题与解决方案

Q1：复苏后细胞活率低？

可能原因：解冻速度过慢、冻存前细胞状态不佳

解决方案：确保快速解冻；优化冻存前细胞培养条件

Q2：复苏后细胞分化率升高？

可能原因：冻存过程应激诱导分化

解决方案：使用埃泽思无血清冻存液，其配方特别添加性维持因子；控制冻存细胞密度在推荐范围

Q3：能否直接复苏后扩增？

建议：复苏后代主要用于恢复细胞状态，第二代开始可用于实验或进一步扩增

专业技术支持

埃泽思Applied cell不仅提供高品质的无血清细胞冻存液，还为客户提供的技术支持。我们的产品经过严格测试，

确保：

高复苏率：平均复苏活率>90%

性保持：复苏后细胞保持正常的核型和性标志物表达

无动物源性：完全化学成分明确，无外源因子风险

批次一致性：严格质量控制，确保不同批次间性能稳定

权威参考文献

1、Hunt CJ et al. Cryopreservation of human embryonic stem cells: a systematic review of freezing and thawing protocols. Cryobiology. 2017.

2、Baharvand H et al. Optimizing human embryonic stem cells freezing culture density for efficient recovery. Stem Cells Dev. 2010.

3、Li Y et al. Chemically defined strategies for human pluripotent stem cell maintenance and expansion. Cell Regen. 2021.

让每一颗珍贵的细胞都安全“休眠”，活力“复苏”——埃泽思无血清细胞冻存液，您专业的选择。

如需产品详细资料、实验方案或技术咨询，请访问埃泽思官方网站或联系我们的技术支持团队。

公司介绍

埃泽思生物（AppliedCell）总部位于上海，专注于细胞治疗、再生医学等相关领域上游产品的研发与生产，公司产品在细胞与基因治疗、细胞样本存储，药物发现，科学研究等领域有广泛应用。经过多年发展，埃泽思现已为高新技术企业，上海市专精特新企业，同时多次获得与上海市级创业奖励。为符合相关药物研发及申报要求，埃泽思建有数千平GMP级生产车间。目前，公司产品已超百种，建立完善的生产质量体系，多项产品取得医疗器械认证，核心产品完成国家药品评审中心（CDE）备案，干细胞类产品完成美国FDA DMF备案，与多家药物研发企业完成IND联合申报。经过多年积累，埃泽思现已成为国内资质最为齐全的细胞培养类上游试剂供应商之一。

除提供标准化产品，公司技术团队还可为广大研发与生产型客户提供定制化开发服务，为广大渠道伙伴提供OEM代工服务。最终我们希望通过技术、工艺以及生产优势，不仅提供标准化产品，还可为广大伙伴提供研发-生产-售后一站式个性化定制服务。