相差观察是观察未染色活细胞或透明样本的关键技术。在奥林巴斯显微镜上正确设置相差，需要完成以下关键步骤：

步：基础准备与光路设置

1. 启动与照明：开启显微镜电源，将光强调至中等亮度。

2. 放置样本：将活细胞或未染色的透明样本置于载物台。

3. 选择物镜：先使用低倍相差物镜（如10X Ph1）进行初始寻找和调焦。相差物镜镜筒上通常标有 “Ph1”、“Ph2” 等字样或 红色/绿色环带作为标识。

4. 切换聚光镜：转动聚光镜上的多功能转盘，从“BF”（明场）位置转到与当前物镜相匹配的相差环形光阑位置（如对于10X物镜，选择 “Ph1” 位置）。此环形光阑代替了明场的孔径光阑。

第二步：核心对中调节（最关键步骤）
5. 插入对中望远镜：从目镜筒中取下一只目镜，插入专用的对中望远镜。若无此配件，部分型号可通过按下伯特兰透镜按钮来实现相同功能。
6. 观察双环：通过中望远镜观察，您会看到两个环：
* 一个明亮的亮环：这是聚光镜中的环形光阑。
* 一个暗灰色或黑色的暗环：这是物镜后焦面上的相板。
7. 精确对中：使用聚光镜两侧专用的相差对中调节螺丝（通常为一对），缓慢调整，使明亮的亮环与暗灰色的暗环完全同心、精确重叠。
8. 复原目镜与检查：移走对中望远镜，装回目镜。在视野中观察样本，此时应能看到具有明显明暗对比、边缘清晰（无过多光晕）的高质量相差图像。

第三步：切换物镜与重新对中
9. 当需要切换到更高倍数的相差物镜（如40X Ph2或100X Ph3油镜）时，必须同步进行以下操作：
* 将聚光镜转盘转到对应的环形光阑位置（如 “Ph2” 或 “Ph3”）。
* 重复第5至第8步的合轴对中操作。因为不同倍率物镜的光路不同，必须重新对中。

重要注意事项：

• 必须使用专用相差物镜，普通明场物镜无法形成相差图像。

• 对中操作是获得高对比度、无伪影相差图像的决定性步骤，不能省略。

• 使用油镜进行相差观察时，需在聚光镜上表面（若为油镜聚光镜）和载玻片之间滴加浸油，以确保聚光镜的数值孔径达到要求。

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