如何对酶标仪吸光度进行校准？

对酶标仪吸光度进行校准需遵循 “准备→基线校准→吸光度校准→验证” 的流程，核心是通过已知标准值的校准物修正仪器读数偏差，具体操作如下：

一、校准前准备

确定校准时机

常规每 3-6 个月校准 1 次；若仪器移动、维修后，或检测中发现标准曲线线性差、同一样本重复检测偏差大，需立即校准。

准备校准工具

校准物：优先使用仪器配套的标准滤光片（覆盖常用波长如 405nm、450nm、540nm、630nm，每个对应波长有明确标准吸光度值）；也可使用标准溶液（如重铬酸钾溶液，需提前确认浓度对应的标准吸光度）。

辅助工具：干净无划痕的空白微孔板（与日常检测用板材质一致）、无尘手套（避免污染滤光片）、移液器（确保加样准确）。

仪器与环境调试

开机预热 30 分钟，确保光源、检测器稳定；清洁样品室（用无尘布擦拭光路玻璃，避免灰尘遮挡）。

控制环境温度（20-25℃）、湿度（40%-60%），避免强光直射和剧烈震动。

二、具体校准步骤

1. 基线校准（空白校正）

将空白微孔板（或加有空白溶液的板）放入样品室，对齐定位标记。

在仪器操作界面选择 “基线校准” 或 “空白校正”，选定需校准的波长（如 450nm、630nm）。

仪器自动读取空白板的吸光度，将其设为 “0”，消除板本身或空白溶液的光吸收干扰。

2. 吸光度值校准

取出空白板，将标准滤光片放入样品室指定位置（部分仪器有专用卡槽，无卡槽则放在空白板的检测孔位，确保完全覆盖光路）；若用标准溶液，需向微孔板中准确加入溶液（避免气泡，若有气泡用吸头刺破）。

进入仪器 “吸光度校准” 功能，输入当前波长下校准物的已知标准值（如 450nm 滤光片标准值 0.500Abs）。

仪器读取校准物的实际检测值，与标准值对比后自动计算并存储 “校准系数”（部分仪器需手动确认生效）。

按上述步骤，依次完成所有目标波长的校准。

3. 校准验证

校准后，再次检测同一校准物，读取各波长吸光度值，计算与标准值的偏差：

绝对值偏差：| 检测值 - 标准值 |≤±0.01Abs（高精度仪器≤±0.005Abs）；

相对偏差：（| 检测值 - 标准值 |/ 标准值）×100%≤±2%（部分要求≤±1%）。

若所有波长偏差均在允许范围，校准合格；若超标，需重新检查校准物是否清洁、放置是否正确，或重复校准流程；多次失败需联系专业人员检修。

三、注意事项

拿取滤光片时戴手套，避免指纹污染（指纹会增加光吸收，导致偏差）；空白板需一次性使用或清洗烘干。

校准后需记录校准日期、人员、校准物信息及结果，形成报告存档，便于追溯。