检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被可溶性蛋白（sPRO）

抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的可溶性蛋白（sPRO）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度

（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.

样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.

标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.

植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.

保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，

在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作步骤

1.

从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2.

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.

样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不加。

4.

除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100

μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5.

弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，

如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板）。

6.

每孔加入底物A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7.

每孔加入终止液50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。