除了表面活性剂，还有哪些因素会影响ELISA检测的特异性？

除了表面活性剂，以下因素也会影响 ELISA 检测的特异性：

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标本因素：

内源性物质：如类风湿因子可与 ELISA 系统中的捕获抗体及酶标记二抗的 FC 段直接结合，导致假阳性；补体可将固相一抗和标记二抗连接起来，造成假阳性；嗜异性抗体能将 ELISA 系统中一抗和二抗连接，引起假阳性；嗜靶抗原自身抗体可与靶抗原结合形成复合物，干扰抗原抗体测定结果。

外源性物质：标本溶血时，红细胞破坏释放的血红蛋白具有过氧化物酶活性，在以辣根过氧化物酶为标记的 ELISA 测定中，会导致非特异性显色；标本被细菌污染，因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，也可产生非特异性显色；标本保存不当，如在冰箱中保存过久，血清中 IgG 可聚合成多聚体、AFP 可形成二聚体，在间接法 ELISA 测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性。

试剂因素：

固相载体：聚苯乙烯 ELISA 板由于原料和制作工艺差别，质量差异大，会影响抗原抗体的吸附和结合，进而影响检测特异性。

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‌包被物纯度：在酶联免疫测定中，试剂的特异性取决于使用抗原的纯度，纯度不高会导致非特异性显色。

包被抗体效价：具有高亲和力和高特异性的包被抗体，是决定试剂特异性的重要方面，效价不足可能导致非特异性结合增加。

封闭剂：封闭是为了封闭固相载体表面尚未被占据的空隙，减少后续步骤中非特异性蛋白的干扰，封闭剂选择不当或封闭不充分，会使非特异性结合增多。

实验条件因素：

pH 与离子环境：最适 pH 一般为 7.2-7.4，偏离此范围可能导致蛋白变性或电荷排斥，影响抗原抗体的特异性结合。

温度与时间控制：孵育温度过高或时间过长，可能会造成非特异性结合增加，导致本底升高；温度过低或时间过短，则可能使抗原抗体结合不充分，影响检测的灵敏度和特异性。

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操作因素：加样不准确，如加样量不准确、加样速度不一致、加样过程中产生气泡等，会导致检测结果出现偏差，影响特异性；洗板不会残留非特异性结合的物质，洗板次数过多则可能会洗脱特异性结合的抗原抗体复合物，都会影响检测特异性。

仪器设备因素：移液器精度不够会导致加样量不准确，孵育箱温度不均匀会使反应条件不一致，酶标仪性能不稳定会影响吸光度的准确测定，这些都可能对 ELISA 检测的特异性产生影响。