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ELISA检测TGF-β1,该如何处理样本?

提供者:上海熹纭生物科技有限公司   发布时间:2025/8/11 15:07:33  阅读次数:268次  进入该公司店铺

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TGF-β1(Transforming growth factor-β1)是一类在结构和功能上具有某些特点的多肽因子家族。该家族包括同二聚体从TGF-β1至TGF-β5,异二聚体有TGF-β1、2。TGF-β1以非活性状态存在,激活时是TGF-β1活性部分的释放。在体外,TGF-β1的活化是对其酸化。TGF-β1具有激活和抑制双重功能。许多TGF-β1的受体调节其生物活性,有受体I(53-65KD),受体II(83-110KD),受体III(250-310KD),受体IV(60KD),受体V(400KD)。TGF-β1是一种多功能细胞生长调节蛋白,TGF-β初由血小板中分离出来,后发现在许多组织中均可表达。TGF-β是多肽家族成员,包括5种形式(1~5)。TGF-β、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)和激动剂A(activin A)有相近的分子结构,因此它们有可能由同一原始基因演变而来。TGF-β刺激未转化成骨细胞(untransformed osteoblastic cell)DNA的合成和细胞的增殖,其对成骨细胞分化功能的作用也因细胞处于不同的分化阶段而不同。有研究表明,TGF-β对骨吸收有双重作用——既抑制又促进。它参与了胚胎的发育、损伤组织的修复、肿瘤的发生和发展等生理病理过程,是目前众多学科的研究热点。
为什么检测TGF-β需要活化样本?
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(图2:活性TGF-βs的合成与释放过程1)


TGF-β初以非活性前体形式(latent TGF-β,L-TGF-β)被合成和分泌,包含信号肽、前结构域和成熟多肽。信号肽被去除后,前体分子通过碱性残基的蛋白水解裂解进一步加工,产生成熟的同型或异型二聚体配体。


潜伏的TGF-β复合物可以通过与潜伏TGF-β结合蛋白(LTBP)形成二硫键,结合成一个潜伏复合物(LLC),这使得潜伏的TGF-β能够稳定储存而不是进一步激活。此外,潜伏的TGF-β还可以与调节性T细胞(Treg)或巨噬细胞表面的跨膜糖蛋白A为主的重复序列蛋白(GARP)和LRRC33结合。在LAP上的Arg-Gly-Asp(RGD)序列与整合素αvβ6或αvβ8相互作用后,TGF-β才能从其潜伏复合物中变构释放。只有从潜伏复合物中释放出来,TGF-β才能具有活性并激活其受体。


在体外,非活性状态的TGF-β通过酸处理可被活化。


使用熹纭生物TGF-β1 ELISA试剂盒时,如何预处理样本?

熹纭生物TGF-β1 ELISA试剂盒,相比其他指标试剂盒额外提供专门用于活化样本的激活液(A液)与终止液(B液)两种组分,针对不同的标本提供参考活化方式如下:15f5bdcef5061006d3e18c7a2b1d6a5d_2e1868856c8a1f69d94554739e2d7dda.png

血清或血浆标本激活方法:

a.在225ul标准品&标本通用稀释液中,加入5μl血清或血浆标本。

b.加10ul A液(激活液),盖紧,上下混匀。2-8℃放置60±2分钟。

c.加10ul B液(终止液),盖紧,上下混匀。(总体积250ul即50倍稀释)

d.即用,或置-20/-70℃可保存3天。计算结果时应乘以稀释倍数。

(注意:不同的标本TGF-β1的水平可能有较大差异,请根据实际情况灵活掌握稀释度,不同浓度稀释仅需要改变稀释液体积)


细胞培养上清标本激活方法:

a.在80ul标准品&标本通用稀释液中,加入100μl标本。

b.加10ul A液(激活液),盖紧,上下混匀。2-8℃放置60±2分钟.

c.加10ul B液(终止液), 盖紧,上下混匀。(总体积200ul即2倍稀释)。

d.即用,或置-20/-70℃可保存3天。计算结果时应乘以稀释倍数。.

(注意:不同的标本TGF-β1的水平可能有较大差异,请根据实际情况灵活掌握稀释度,不同浓度稀释仅需要改变稀释液体积)



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