CELL-WISE品牌CW003 Insect Cell Medium昆虫培养基具体介绍

HSF95 Insect Cell Medium（CW003）

产品基本信息

• 产品名称：HSF95昆虫细胞培养基

• 产品货号：CW003

• 产品规格：1L

产品描述

CW003培养基专为sf9、High Five等昆虫细胞的悬浮培养及瞬时表达设计，含有细胞生长所需的全价营养体系，无需额外添加血清、水解物等成分，可直接用于细胞培养与重组蛋白生产。

产品特点

1. 无血清配方：排除血清批间差异与外源污染风险，保障实验数据稳定性与生产工艺一致性。

2.即用型全培养基：预配制完成，无需补加任何成分，可直接用于细胞培养，简化操作流程。

3.高效培养性能：支持sf9、High Five细胞的悬浮驯化与高密度培养（细胞密度可达10⁷级水平），适合大规模工艺放大。

4.表达系统兼容：与杆状病毒载体表达系统（BEVS）高度适配，显著提升重组基因蛋白的生产效率。

基础参数

产品使用方法

一、细胞驯化与传代

1.培养条件

• 温度：27±0.5℃

• 摇床转速：110-130 rpm（建议使用带挡板摇瓶）

• 传代密度：0.8-1.2×10⁶cells/mL（以活细胞计数为准）

2.直接驯化

适用于多数已适应悬浮培养的细胞系：

• 直接以CW003培养基替换原培养基，按日常传代比例（如1:3-1:5稀释）进行换液，维持培养条件不变。

3.渐进式驯化

适用场景：贴壁培养细胞或对培养基成分敏感的细胞系

注意事项：选择低代次（≤10代）、处于对数生长期（活力≥95%）的细胞进行驯化。

• 阶段①：

• 在原培养基中复苏细胞，连续传代2-3次至生长稳定。

• 采用混合培养基逐步过渡：原培养基：CW003比例依次为75:25→50:50→10:90，每代维持细胞密度0.8-1.1×10⁶cells/mL，每48小时传代一次。

• 阶段②：

• 当细胞在含≥90% CW003的培养基中生长正常（倍增时间≤24小时，活力≥92%），可完全过渡至100% CW003培养基。

• 连续传代3-4次，若细胞密度、活力及形态均保持稳定，即完成驯化。

二、细胞复苏

1. 快速解冻：

• 从液氮中取出冻存管，立即浸入37℃水浴（轻微晃动），120秒内完成解冻，至管内仅剩少量冰晶。

2.换液重悬：

• 在生物安全柜中，将细胞悬液转移至50mL无菌离心管，加入10mL预热至37℃的CW003培养基。

• 离心条件：175×g，5分钟，弃上清。

• 用20-30mL预热培养基重悬细胞，转移至摇瓶，初始培养密度建议为0.3-0.5×10⁶cells/mL。

三、细胞冻存

1.细胞准备

• 选择处于对数生长期（活力≥98%）、状态良好的细胞，计数后调整密度。

• 冻存密度：1.0-2.0×10⁷cells/mL（推荐2.5-3.5×10⁷cells/mL以提升复苏效率）。

2.冻存液配制（现用现配）

• 配方：45%新鲜CW003培养基+ 45%细胞培养上清（原培养基）+ 10% DMSO（体积比），充分混匀后置于4℃预冷。

3.操作步骤

• 离心收集细胞：175×g，5分钟，弃上清。

• 用预冷的冻存液重悬细胞，确保均匀无结块。

• 分装至无菌冻存管（1mL /支），标注细胞信息与冻存日期。

• 程序降温：

• 将冻存管放入填充异丙醇的程序降温盒（提前4℃预冷），置于- 80℃冰箱过夜（降温速率约1℃/分钟）。

• 次日转移至液氮罐中长期保存。

注意事项

1. 培养基开封后需避光保存，建议30天内用完，避免反复冻融。

2.驯化、复苏及冻存过程中，建议定期检测细胞活力（台盼蓝染色法）与形态，确保细胞状态符合实验要求。

3.高密度培养时，需监控溶氧（DO）与pH值，必要时通过补料或气体调控维持培养环境稳定。