茯砖茶中冠突散囊菌的检测

研究背景及意义

茯砖茶又称茯茶，黑茶类，属于后发酵茶，能够随时间的推移慢慢地陈化、香醇，可补充各类维生素、微量元素。黑茶又叫边销茶，这是因为黑茶多数销往西北、西南市场，其饮用人群主要是食用牛肉、羊肉、奶酪等高脂肪食物和缺少蔬菜、水果的边疆少数民族。茯茶被称为“丝绸之路上的神秘之茶”。一直以来，茯砖茶是作为边疆少数名族日常生活中不可缺少的必备品，在边疆享有“宁可三日无粮，不可一日无茶”的美誉，其奥妙与茯砖茶的品质风味是分不开的。

冠突散囊菌，属益生菌，是茯砖茶在特定温湿度条件下，通过“发花”工艺长成的自然益生菌体，俗称“金花”，可生长在茯砖茶、土壤、冬虫夏草、中药片、沉香、木屑等基物上。经科学研究，“金花”对后发酵茶品质不但没有影响，反而“金花”能分泌茶叶中的淀粉酶和氧化酶，可催化茶叶中的淀粉转化为单糖，催化多酚类化合物质氧化，使茶叶汤色变棕红，消除粗青味。在口味上更加醇和爽口，甜滑回甘，它对人体有许多益处。

茯砖茶因其独特的“金花菌”以及品质风味而出名，边疆少数名族更是将“金花”视为衡量茯砖茶品质的标准，“金花菌”逐渐便成为了科学家们研究的焦点。“金花菌”这种微生物存在于自然界中，在空气、茶叶中都能生长。茯砖茶里的冠突散囊菌是一种霸王菌，在茯茶发花过程中，当冠突散囊菌滋长出来以后，它就能够抑制其它微生物的生长繁殖，最后就能形成以冠突散囊菌群为优势主体的微生物群落，促进物质转化和品质形成。

实验目的

对茯砖茶其的冠突散囊菌进行了详细的微生物学检验。通过对比不同温度、不同培养基对冠突散囊菌生长的影响，为茯砖茶的生产和品质提升提供理论依据。

实验原理

检测茯砖茶中冠突散囊菌的原理是通过稀释分离法将样品中的微生物分散，利用选择性培养基促进冠突散囊菌的生长，通过适宜的培养条件使其形成菌落，再通过形态学和分子生物学方法进行鉴定，最后通过平板计数法计算冠突散囊菌的数量。

实验方案

实验材料及试剂

随机选择3批茯砖茶样品；

生理盐水、孟加拉红琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

实验用品及仪器

霉菌培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、数显恒温水浴锅、无菌均质器、电子天平、洁净工作台、移液枪等。

实验步骤

样品处理：使用粉碎机将茶砖整体粉碎过筛后称取25.0 g茶样进行检测。加85℃以上的，225 mL 0.85%灭菌生理盐水，浸泡10~30 min，用均质器拍打60 s，制成1：10的茯砖茶样品匀液。

样液制备：取1 mL1：10样品匀液注入含有9 mL灭菌生理盐水的试管中，涡旋10 s混匀，此液为1:10²的茯砖茶样品匀液。以此类推制成1:10⁷的茯砖茶样品匀液。

空白对照：在进行10倍递增稀释同时，每个稀释度分别分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内，同时分别取1 mL无菌生理盐水注入2个无菌平皿作空白对照。

平行样品：每个样品根据三个温度点称取三份样液，每份样液的每个温度点做三份试验，对比三种温度（45℃、60℃、100℃）和两种培养基（孟加拉红琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基）。

平板制备：样品制作完成后，每个样品的每个温度点及时将20~25 mL冷却至46℃的孟加拉红琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂倾注无菌平皿，并转动平皿使其混合均匀，置水平台面待培养基完全凝固。

培养条件：将涂布好的平板置于28～30℃的霉菌培养箱中培养3~5天。

结果讨论

研究通过对比不同温度和水浴时间下，两种培养基对茯砖茶中冠突散囊菌生长情况的影响，得出以下结论：在60℃水浴10分钟，并选用孟加拉红琼脂培养基进行培养时，冠突散囊菌的生长情况最佳。这可能与孟加拉红培养基中富含的营养成分有关，有利于冠突散囊菌的生长繁殖。这一结论为茯砖茶中冠突散囊菌的微生物学检测提供了参考依据，有助于保证茯砖茶的品质和安全性。