人嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）Elisa试剂盒说明书

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检测范围：96T 0.6ng/ml - 16ng/ml
使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）水平。用纯化的人嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入嗜环蛋白/亲环素A（CyPA），再与HRP 标记的嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）浓度。
人Elisa试剂盒组成:
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
人Elisa试剂盒操作步骤:
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算:以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
人嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）Elisa试剂盒说明书