结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA_产品说明_仪器仪表技术文献

结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA

提供者：上海科研试剂供应商发布时间：2025/3/12 7:55:59 阅读次数：2514次进入该公司店铺

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1. 检测原理结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA
PERT 技术：结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA，通过 PCR 扩增产物并实时监测荧光信号（SYBR Green 染料标记）。
特异性设计：以 MS2 RNA 为模板，通过标准曲线定量逆转录酶活性，间接反映样本中逆转录病毒污染水平。
结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA
2. 灵敏度
检测下限：可检测低至 10⁻⁸ 单位 / 微升的逆转录酶活性（如 AMV-RTase 或 MMLV-RTase）。
病毒颗粒关联：约 10³ 皮单位（pU）逆转录酶活性对应 70-80 个逆转录酶分子或 1-10 个病毒粒子。结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA

3. 线性范围
标准曲线：覆盖 10⁻³ 至 10⁻⁸ 单位 / 微升（5 个数量），适用于不同病毒污染水平的样本。
定量准确性：通过 Log ΔRn 相对定量参数，Ct 值与逆转录酶浓度呈强相关性。

4. 特异性
抗干扰设计：加入肝素抑制 DNA 聚合酶活性，避免细胞 DNA 污染导致的假阳性。
病毒类型覆盖：适用于多种逆转录病毒（如 HIV、HTLV 等）的活性检测。
结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA
5. 准确性
内参校正：通过标准品建立的线性关系计算样本浓度，误差范围小。
污染控制：操作需在 RNA 酶 - free 环境中进行，使用带滤芯枪头避免交叉污染。

6. 检测限
定性检测限：单管可检测单个逆转录病毒颗粒的活性。
定量检测限：基于荧光阈值（Ct 值）和标准曲线，实现定量。

7. 精密度
批内重复性：同一样本多次检测变异系数低（需标准化操作流程）。
批间一致性：不同批次试剂性能稳定（需参考产品说明书验证）。

8. 操作便捷性
一步式操作：逆转录与 PCR 扩增在同一管内完成，减少移液步骤。
时间效率：总耗时约 3-4 小时（含孵育和 PCR 扩增）。
仪器兼容性：适配主流荧光定量 PCR 仪（如 ABI、Roche 等）。

9. 样本类型
适用范围：生物制品（如疫苗）、细胞培养上清液、细胞裂解液等。
特殊要求：需低温操作（4℃）以保护酶活性，避免反复冻融。

注意事项
RNA 质量：样本 RNA 完整性影响检测结果，需确保 RNA 无降解。
假阳性控制：细胞 DNA 污染可能导致非特异性信号，需通过肝素抑制 DNA 聚合酶。
法规合规：符合 WHO 及《中国药典》对生物制品逆转录病毒污染的检测要求。

注：具体参数可能因试剂盒批次和实验条件略有差异，建议严格按照产品说明书操作并进行预实验验证。