产品货号：T10229

产品规格：100ml

产品简介：

在生物科研域，经常需要去除红细胞，去除红细胞的方法有多种，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化铵红细胞裂解液、Gey＇s Lysis Buffer。尚宝生物Triton-NH4OH细胞裂解液(Triton-NH4OH Lysis Buffer)经过优化配方，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。本裂解液经过滤除菌，经过 Triton-NH4OH Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

产品组成：

自备材料：

1. 胰蛋白酶

2. 离心机

3. PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液

4. 胎牛血清

操作步骤(仅供参考)：

(一)组织细胞样本的常规操作

1. 制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清。

2. 裂解: 加入3～5倍细胞沉淀体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3. 离心: 4℃，400～500g离心5min，弃红色上清。如无低温离心机，本步骤亦可在室温下操作。

4. 如果发现红细胞裂解不，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。

5. 洗涤：根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃，400～500g 离心2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6. 如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。

7. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)

1. 制备细胞悬液：新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清。

2. 裂解：加入细胞5倍细胞沉淀体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～2min。本操作步骤在 4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3. 加入15～20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。

4. 离心：4℃，400～500g离心5min，弃红色上清，本离心步骤亦可在室温下操作。

5. 如果发现红细胞裂解不可以重复上述步骤2～4各一次。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

(三)血液样本的常规操作

1. 取新鲜抗凝血，400～500g离心5min，弃上清。

2. 裂解: 加入6～10倍细胞沉淀体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～5min。本操作步骤在 4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。(特别提醒：对于鼠的血液，裂解1～2min已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4～5min，并且裂解过程中轻轻摇动以促进红细胞裂解。)

3. 离心: 4℃，400～500g离心5min，弃红色上清。如无低温离心机，本步骤亦可在室温下操作。

4. 如果发现红细胞裂解不，可以重复上述步骤2和步骤3一次。

5. 洗涤: 根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃，400～500g离心 2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

注意：对于微量或少量的血液样本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer 进行第2步操作，并在4℃或室温裂解4～15min。对于鼠的血液，裂解4～5min已经足够； 对于人的外周血，宜延长裂解时间至10min，但通常不宜超过15min，并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。

(四)血液样本的快速操作(无需洗涤)

1. 新鲜抗凝血中加入10倍体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer，轻轻吹打混匀，裂解4～15min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。（特别提醒：对于鼠的血液，裂解4～5min已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10min，但通常不宜超过15min，并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。）

2. 加入20～30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。

3. 400～500g离心5min，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4. 如果发现红细胞裂解不，可以重复上述步骤2和步骤3一次。

5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

注意事项：

1. 制备细胞悬液时应根据实验需要，不一定要制备成单细胞悬液。

2. 后续试验如果是用于细胞培养，操作过程中应注意无菌操作，尽量在超净工作台内操作。

3. 离心步骤尽量在4℃离心机上操作。

4. 常规步骤不快速步骤的区别在于：常规步骤多了一步洗涤过程的离心，可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好，不需要大体积的离心管；快速步骤少了一次离心过程，洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

5. 离心洗涤后，通常微量的红细胞不会影响后续的检测。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。