反相色谱柱是我们应用广泛的色谱柱类型，反相色谱柱键合相主要包括：C18、C8、C4、Phenyl、aQ、等。对于以上色谱柱，我们在使用及维护的时候可以按照同样的操作方式：

　　1、在条件允许情况下，在使用前最好对新色谱柱按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。

　　2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。

　　3、样品

　　最好将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱，则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物，最好使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂（例如，流动相为水，样品溶剂为甲醇），为达到较好峰形，需要降低进样量（以250x4.6mm规格为例，小于10μL）。

　　4、流动相

　　所有流动相，特别是含有缓冲盐的流动相，反相色谱柱最好当日实验当日配制；如果使用了前日配制的流动相，请确保流动相pH值没有变化，并确保流动相没有长菌。流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱尽量在pH2~8范围内使用。请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水（>95%）作为流动相，可能会造成保留时间的不稳定或者色谱柱键合相的损害。如果使用高比例水或者100%水相为流动相，建议使用亲水柱。

　　5、色谱柱平衡

　　在进行分析之前，请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱，以使色谱柱达到平衡。

　　色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算：

　　V=0.68πr2

　　V为色谱柱柱体积（mL），r为色谱柱内径（cm），L为色谱柱长度（cm）。

　　6、色谱柱保护

　　对于“脏”的样品以及组分未知的样品，请尽量使用在线滤器或保护柱，如果可能，使用SPE小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。

　　7、色谱柱清洗

　　常规清洗：

　　在储存反相色谱柱之前，请使用至少20倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱（去除缓冲盐），再用更强的溶剂冲洗色谱柱（去除强保留成分，反相色谱通常使用甲醇或乙腈），然后使用合适的溶剂储存色谱柱。