ColProof^®质粒小量提取试剂盒

Col-P0101

试剂盒应用

本试剂盒采用硅胶膜吸附技术，高效专一地结合质粒DNA，操作简单、快速。一次可处理1-4mL过夜培养的细菌培养液，最多可提取20µg质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA超螺旋含量高，适合酶切、PCR、测序、连接转化、文库筛选、体外转录、转染等实验。

本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

备注：

1、次使用前，在洗涤液PW中加入48mL无水乙醇，并标记“√”和时间，避免重复加入。

2、若溶液产生沉淀，使用前可在37℃水浴中预热10分钟溶解沉淀。

3、独立包装的RNaseA溶液可在室温保存12个月，使用前全部加入溶液P1中，混合均匀2-8℃保存6个月。

保存条件

室温保存一年。

自备材料

无水乙醇

使用方法

1、取1-4mL过夜培养的细菌，加入离心管中，12,000rpm离心1分钟收集细菌。尽可能去除上清。

2、加入150μL溶液P1（使用前检查是否已加入RNaseA溶液）至沉淀的离心管中，使用移液器轻轻吹打或涡旋振荡器悬浮菌体。

3、向离心管中加入150μL溶液P2，温和上下翻转6-8次使菌体充分裂解。此时溶液变澄清。

注意：温和混合，避免剧烈震荡。

4、沿管壁向离心管中加入350μL溶液P3，快速上下翻转6-8次，充分混匀，此时溶液出现絮状沉淀。

5、12,000rpm离心5-10分钟。

6、转移550-600μL上清液至吸附柱P中（提前将吸附柱P置于收集管中），尽可能不要吸取到沉淀。

7、12,000rpm离心30秒。倒收集管中废液，将吸附柱P放入收集管中。

8、加入500μL洗涤液PW（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30秒。倒收集管中废液，将吸附柱P放入收集管中。

9、重复步骤8一次。

10、12,000rpm离心1分钟将洗涤液PW去除。

注意：尽可能将无水乙醇挥发完全。

11、将吸附柱P置于干净的离心管中，向吸附柱中间滴加50-100μL洗脱液PW。

注意：洗脱液PW体积不低于50μL，以免影响回收效率。为了提高洗脱效率，可将洗脱液PW提前置于65℃水浴中再使用。

12、12,000rpm离心1分钟得到质粒DNA溶液。-20℃保存。