小 M, 小 M, 我导儿开始安排测 IC50 了，虽然查文献经常遇到……但还是晕，概念分不清？不懂如何测？有啥区别？确实！大家常在文献中看到 IC50、EC50、ED50 等数值的测定，实验不迷茫~我们先从大家最熟悉的 IC50 值开始。

IC50(Half maximal inhibitory concentration) 又叫半数抑制浓度，So，单位是浓度单位，比如 nM、µM 等等。

我们常在文献中看到 IC50、EC50、ED50 等等数值的测定，这些指标被广泛应用于药物开发、毒理学、基础研究等领域，为理解药物效应和优化治疗策略提供了有力支持。

(2) IC50 值测定：对初筛所得 33 个分子化合物复筛 ，将其按实验设计加入激酶反应体系中，进行 IC50 值测定。

(3) 发光测定：通过发光测定监测 CaMKII-δ 磷酸转移酶活性（注意：如果激酶反应不是在室温下进行，在加入 ADP-Glo™ 试剂之前，将板平衡至室温）。

(4)记录发光：使用微孔板读数仪记录读数。

(5) 数据分析：数据以平均值 ±SEM 表示。使用 GraphPad Prism 版本 8.01 (GraphPad Software, Inc.) 和 SPSS 24.0 软件包 (IBM SPSS Statistics，版本 24.0) 进行统计分析。

图 3. 吡啶和噻唑衍生物对肺癌 (A549) 细胞系的抑制作用[2]。

(1) 化合物制备：将合成的化合物及参考药物阿霉素溶解于 DMSO 中。准备不同浓度的工作溶液以供实验使用。

(2) 细胞处理：将预培养的细胞系暴露于不同浓度的测试材料，在 37°C 下孵育 24 小时。使用 PBS 清洗去除死细胞。

(3) MTT 染色：向每个孔加入 25 µL 0.5% MTT 染液。在 37°C 条件下孵育 3-4 小时。

(4) 溶解与读数：加入 0.05 mL DMSO 溶解细胞内形成的甲瓒晶体，并在摇床上放置 30 min。利用 ELISA 板读数仪测量各孔的吸光度值。

▐ IC50 值的数据处理

• 实验设计：进行细胞或酶实验，将靶标 (如细胞系、酶等) 暴露于多个不同浓度的药物中。

• 记录数据：测量药物对靶标的抑制效果，例如细胞存活率、酶活性或代谢产物变化。

• 处理数据：将所得表格数据进行转化，使用 Graphpad prism 软件计算—创建表格—输入浓度和抑制率—点击 Analyze，选择对数变换--通过非线性回归 (Non-linear regression) 对实验数据进行拟合---得 IC50 值，其标准曲线为 S 型曲线。

图 4. IC50 值的标准曲线。

需要注意的是！虽然 IC50 的应用十分广泛，但 IC50 值是通过体外实验获得的，仅为体外数据，不能完全反映药物在体内复杂环境下的效果。