今天来给大家介绍细胞培养实验中，血清解冻的正确方法。

首先，刚拿到的血清，为保证血清中各种细胞因子的活性，应赶紧放进-20℃冰箱中，避免反复冻融。

当需要使用血清时，从-20℃冰箱中取出后，许多人会采用直接在4℃冰箱里过夜融化的方法，但在实际操作中，很多人会碰上血清出现沉淀或者由于血清中因子活性发生波动，而导致细胞培养发生波动等各种问题。

关于沉淀析出的原理：

我们都知道，在血清是含有多种大小分子蛋白以及水的混合物。当血清融化时，各种成分融化的速度会非常不同：蛋白质等干物质会先融化，水这类溶剂会相对滞后地融化。因此，在血清融化后半程，我们经常会看到，在瓶子中间剩下一根白色或无色的冰柱，这说明大量蛋白已融化，而水还没化完，此时大量蛋白溶于少量的水，沉积在瓶子的底部，有的蛋白质就会饱和析出，呈现上黄下红的分层浑浊液的状态，而一旦析出，有的蛋白就很难再溶解回去

在使用过程中很容易引起沉淀、混合不均匀、局部浓度过高等问题，影响细胞生长。

更重要的一点是，血清中珍贵的生长因子等活性物质，它们在解冻过程中，有着与细胞复苏类似的经历，都需要快速解冻才能大程度地保留生物活性。显然，4℃过夜这样的长时间处理，很易导致一部分「营养成分」的损失，影响细胞生长。

所以，为了更好地保留血清中的活性成分，使细胞培养更稳定，上一直使用三步法融化，可大限度减少沉淀出现，保留血清中因子的活性。具体方法见下表，有需要的同学可以截图保存。

要点一：此三步融化法，适用于所有血清，在水浴过程中，血清的平面要尽量完全浸在水中，但瓶口不要没入水中，防治瓶口污染。在融化过程中要* 好经常慢慢摇动瓶身，使血清混匀，但摇动不要剧烈，尽量不要产生泡沫！

要点二：如果你的血清平时是储存在-80℃的血清，融化前则需提前几天先转移至-20℃冰箱中复温（至少24小时），再使用三步法溶解，避免温差过大，更易导致血清中蛋白凝集。

要点三：为限度保留血清中因子的活性，减少冻融次数，血清应遵循现用现配，现配现解冻的原则。彻 底解冻的血清，应根据实验需求，将其分装，保证每一份够一次使用量即可，比如：25ml/管、50ml/管等。分装好的血清，密封好后，立即放回-20℃冰箱继续冷冻储存。需要配制培养基的时候，再从-20℃冰箱中取出一管来尽快解冻使用（* 好能全部配成培养基，不要有剩余），配好的培养基在4℃冰箱储存* 好不超过一周。

好血清，正确用，以市面上公认好用的Ausbian品牌进口血清为例，十几年来的好口碑，与十几年不遗余力地推广血清的正确使用方法是分不开的。

选对好血清，会让细胞养得好，用对正确的方法，会让次次细胞都养得好！

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