一、实验材料：6孔板；marker笔；直尺；20微升枪头（灭菌）；无血清培养基；PBS。

二、操作准备：

所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）

三、操作流程：

1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过一夜能铺满。

3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。

4.用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

5.放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样，拍照。

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