中华人民共和国农业行业标准

NY/T 2890-2016

稻米中γ-氨基丁酸的测定高效液相色谱法

Determination of γ-aminobutyric acid in rice-HPLC

前言

本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。

本标准由农业部种植业管理司提出并归口。

本标准起草单位：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所、农业部农产品质量监督检验测试中心（昆明）。

本标准主要起草人：汪禄样、黎其万、邵金良、刘兴勇、王丽、刘宏程、杨东顺、樊建麟。

1范围

本标准规定了稻米中γ-氨基丁酸含量的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于稻米中γ-氨基丁酸含量的测定。

本方法检出限为0.10 mg/kg，定量限为0.20 mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样经乙醇-水溶液提取，经4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯（DABS-Cl）衍生，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。

4试剂与材料

除非另有规定，使用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682 中规定的一级水。

4.1无水乙醇（C2HOH）：优级纯。

4.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.3提取溶液：无水乙醇+水=4+1（V+V），取 400 mL无水乙醇和100 mL水混匀。

4.4 碳酸氢钠溶液：称取0.40 g碳酸氢钠，用水溶解并稀释至10 mL，现配现用。

4.5 4-二甲基胺基偶氨苯-4-磺酰氯溶液：称取4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯20.0mg，用乙腈溶解并稀释至10 mL，现配现用。

4.6三水合乙酸钠溶液：称取3.40 g三水合乙酸钠，用水溶解并稀释至500 mL，经微孔滤膜（4.10）过滤。

4.7 γ-氨基丁酸（γ-aminobutyrie acid， GABA）：CAS 号56-12-2，纯度≥99.9%。

4.8 标准储备溶液：精确称取γ-氨基丁酸标准品10.0 mg，用乙腈溶液溶解并定容至10 mL，即为1 000 mg/L的标准储备液，于-18℃下，贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，保存有效期为3个月。

4.9标准使用液：在使用中将标准储备溶液逐级稀释成2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L

和100.0 mg/L或其他浓度的γ-氨基丁酸标准使用液，现配现用。

4.10滤膜：0.45μm，水相滤膜。

5仪器与设备

5.1高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。

5.2组织捣碎机：转速 1 0000 r/min。

5.3分析天平：感量为0.01 mg，0.01g。

5.4振荡水浴锅。

5.5 超声波清洗器。

5.6 旋涡混匀器。

5.7 离心机：最大转速10 000 r/ min。

6分析步骤

6.1试样制备

样品经混匀后，缩分至约50g，经研磨至全部通过孔径0.25mm（60目）筛的试样，混匀，装入密闭容器中，室温下保存。

6.2提取

称取1.0g样品于50 mL离心管中，加入10 mL提取溶液（4.3），超声提取30 min后，在旋涡混匀器上振荡2min，静置5min，于5000r/min离心5min，将上清液转入25mL容量瓶中，样品残渣再用10 mL提取溶液（4.3）提取1次，合并2只提取液，用提取液（4.3）定容至25 mL，摇匀待衍生化。

6.3 衍生化

准确吸取1 mL试样溶液或标准工作溶液于具塞试管中，加入0.20mL 碳酸氢钠溶液（4.4）和0.40mL 4-二甲基胺基偶氨苯-4-磺酰氯衍生试剂（4.5），混匀后在70℃水浴中街生反应20min，用微孔滤膜（4.10）过滤，待测。

6.4 测定

6.4.1 色谱参考条件

色谱柱： C18柱250m×4.6 mm，5μm；或与之性能相当者；

检测波长：436 nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL；

流动相：乙腈（4.2）十三水合乙酸钠溶液（4.6）（35+65）；

流速：1.0 mL/min。

6.4.2 色谱分析

分别将标准溶液和试样溶液，注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。色谱图参见附录A。

7结果计算

试样中γ-氨基丁酸含量按式（1）计算。

式中：

ω——试样中γ-氨基丁酸含量，单位为毫克/千克（mg/kg）；

ρ——样液中γ-氨基丁酸测定质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

V——一定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）；

测定结果取两次测定的算术平均值，计算结果保留三位有效数字。

8精密度

在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。