微生物致病菌检测仪-志贺氏菌检测试剂盒操作说明书

志贺氏菌快速检测试剂盒是基于公司科研团队诸多创新性成果，针对快速检测需求，实现在恒定温度条件下的快速检测，通过配套机器微生物致病菌检测仪快速判读结果。

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【预期用途】

志贺氏菌检测试剂盒可用于志贺氏菌快速检测和筛查。

【产品特点】

1. 反应速度快，仅需 60 min。

2. 操作简单，快速判读。

3. 灵敏度高，本试剂盒检测限为10CFU/mL。

4. 特异性高，*的多重体系降低假阳性的出现。

【试剂组成】

序号 名称 规格 数量/支

1 试剂预混液（深色遮光管） 750μL 1

2 生物酶（黄盖管） 100μL 1

3 封闭剂（透明盖管） 300μL 1

4 阳性对照（红盖管） 100 μL 1

5 快速释放剂（10毫升保存管） 3ml 1

【实验需要的器材】

微生物致病菌检测仪、0.45μm滤膜、擦拭拭子、涡旋振荡器、离心机、2-20μL移液器、20-200μl 移液器、1.5ml离心管、96孔板、200ul 反应管。

【实验前准备】

1、将微生物致病菌检测仪通电并开机；将涡旋振荡器、离心机通电等待使用；

2、将微生物快速释放剂、试剂预混液、生物酶、封闭剂、阳性对照从冰箱取出恢复至室温。试剂预混液自然解冻后涡旋混匀，瞬时离心待用。

3、取出1.5ml离心管若干只，200ul离心管、96孔板冰盒，0.45μm滤膜若干。

【样品前处理】

实验器具必须洁净并使用一次性吸头（每次取试剂前及时更换新的吸头），以避免污染干扰实验结果！！！

1、采样

水样本每次采样量为250ml；固体样本使用拭子在样本表面及可疑感染处进行擦拭，擦拭前拭子可用纯水进行蘸湿处理。

2、水样本过滤

将上述样本用孔径为0.45μm的滤膜进行过滤，将水样中的微生物截留在滤膜上。

3、微生物释放

取下滤膜，将滤膜加入到1.5ml离心管中，离心管中加入150-200μL快速释放剂，涡旋震荡混匀，100℃条件下热浴5分钟；固体样本擦拭完成后将拭子头投入1.5ml离心管中，离心管中加入150-200μl快速释放剂，涡旋震荡混匀，100℃条件下热浴5分钟；热浴完成后离心管内液体即为待检测样本。注：煮沸5分钟时，离心管应封闭完整，防止崩开。

【实验步骤】

1、取 n 个反应管（n=样本数+阳性对照1+阴性对照1），单个反应体系配制如下：

试剂 体系配制

试剂预混液（深色遮光管） 44×（n+1）μL

生物酶 （黄盖管） 2.5×（n+1）μL

2、用移液器在一个新的 1.5 mL 离心管中加入上述试剂，涡旋混匀后瞬时离心。在每个反应管中加入46μl混匀后的试剂，加入约10μl封闭剂（透明盖管）进入反应管中。

3、在上述n个反应管中，用移液器在一个反应管中加入阴性对照（纯水即可）4μl，更换吸头后在下一反应管加入阳性对照（红盖管）4μl，再次更换吸头后在下一反应管中加入待检样本4μl，每次加样均需更换吸头。每管所得反应总体积为50μl，加样时吸头需穿过封闭剂将模板加至反应管底部。盖紧管盖，瞬时离心。（吸取及加样时注意不要产生明显气泡）；

4、将准备好的反应管，放置到检测设备中，按照检测程序63℃检测60min。

5、将检测管放入仪器后，点击调零，点击检测，开始检测。反应结束后，机器自动判读，给出阳性或阴性结果，同时可点击页面上“图谱”可观察各孔光强变化曲线，对给出的结果进行验证。实验结果在阳性对照显示“阳”，阴性对照显示“阴”的情况下为有效实验。显示“阳”即该孔位样本含有该病菌，显示为“阴”即该孔位样本不含该病菌，并同时给出相应定量。若阴、阳性对照反应管结果与上述情况不符，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品公司联系。

【注意事项及安全提示】

1. 使用本试剂盒前请仔细阅读说明书。不同批号的产品请勿混合使用，避免反复冻融，请在有效期内使用试剂盒，由于操作不当引起的误判，以及有此误判引发的其他事项，本公司概不负责。

2. 检测空间应严格分区操作，在空间条件允许情况下，试剂配置区用于配置反应所需要的所有试剂；样品前处理区用于待测样品的处理及加样；扩增观察区用于反应进行和结果判读。各区内空间独立，试验用品专用，避免交叉污染。另外，样品处理区建议配备超净工作台，所有步骤严格按照说明书的要求进行。

3.加样时应尽量避免产生气泡，反应前注意观察反应管是否盖紧，以免泄露，造成污染。实验中所使用的离心管、吸头应保证无菌、无污染。试剂盒内阳性对照应视为具有污染性物质，应避免污染其它样本和反应试剂，导致错误检测结果。

4. 检测过程中建议穿洁净工作服，带一次性手套，使用的枪头需提前灭菌。

5. 阳性对照可能会作为污染源，污染其他试剂和待检样品，导致出现假阳性结果，在加样过程中建议最后加入阳性对照。

6. 上机前注意检查反应管是否盖紧，以免泄漏污染仪器。在反应结束后切忌开盖，以防气溶胶污染。

7. 试剂盒使用完毕废弃时按照废弃物相关规定处理，由使用者自行负责处理。

8. 工作台及各物品定期用 1%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯处理。

【贮存方法及有效期】

1、本品应贮存在温度-20℃范围内

2、有效期6个月

3、生产日期见盒装标签