注意：正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1261

产品规格：100管/48样

产品简介：

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与

乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH 之间互变。

LDH 催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

产品内容：

提取液：60mL×1瓶， 4℃保存；

试剂一：液体7 mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用，配好后-20 ℃保存，可保存两周，禁 止反复冻融；

试剂三：液体7 mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存；

丙酮酸钠标准液：液体1mL×1支，4℃保存，2µmol/ml。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

3、丙酮酸钠标准液：取100µL标准液，倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做标准曲线。

二、测定操作：

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

三、LDH 活力单位计算：

1、计算样品丙酮酸的含量，即将∆A带入回归方程中（x），计算y值

2、血清（浆）LDH活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mL）=y×V样÷V样÷T×10³=66.7×y

3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mg prot）= y×V样÷（Cpr×V样）÷T×10³=66.7×y÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/g鲜重）= y×V样÷（W÷V样总×V样）÷T×10³=66.67×y÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/10⁴ cell）= y×V样÷（500÷V样总×V样）÷T×10³=0.133×y

V样：反应体系中加入的样本体积，10µL=0.01mL；V样总：加入的提取液体积，1mL；T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；10³：1µmol/mL=10³nmol/mL。