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在正相色谱中，一般采用性键合固定相，硅胶表面键合的是性的有机基团，键合相的名称由键合上去的基团而定。常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)键合相。流动相一般用比键合相性小的非性或弱性有机溶剂，如烃类溶剂，或其中加入一定量的性溶剂(如lu仿、醇、乙腈等)，以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离性化合物。一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。组分的分配比K值，随其性的增加而增大，但随流动相中性调节剂的性增大(或浓度增大)而降低。同时，性键合相的性越大，组分的保留值越大。该法主要用于分离异构体，性不同的化合物，特别是用来分离不同类型的化合物。

在反相色谱中，一般采用非性键合固定相，如硅胶-C18H37(简称ODS或C18)硅胶-苯基等，用强性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。

正相色谱和反相色谱的区别：

本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料性强,洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料性弱，洗脱顺序由强到弱。

1、正相色谱

正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有性官能团胺基团，如(NH2，APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他性基团性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的性大小，即性较弱的组份zui先被冲洗chu色谱柱。正相色谱使用的流动相性相对比固定相低，如正已烷(Hexane)，lu放fang(Chloroform)，二氯甲烷(Methylene Chloride)等。

2、反相色谱

　反相色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出se谱柱的顺序是性较强的组分zuixian被冲洗出，而性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

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