硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX) 样本的处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
① zhun确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g,4℃离心5min。
③ 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11100g,4℃离心10min。
④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的 NOX(此步可选做)。
⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10,重复30次),用于NOX活性测定。
血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)试剂四于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、200μL试剂四和40μL试剂五,混匀,记录600nm处20s时吸光值A1和1min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。
NOX 活力单位的计算
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)NOX活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2500×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变
CelluloseDE-52100g/500g/2kg原装Whatman4057050
(纤维素DE-52)
CelluloseP-11500g原装/100gWhatman4071050
(纤维素P-11)
Cephalothin100mg/1g原装/5g原装Sigma C-4520
(先锋霉素I)
CesiumChloride10g/25g/50g/500g原装Sigma C4036
(氯化铯)
CesiumSulfate5g/25g/100g原装Amresco 0473
(硫酸铯)
CetrimideAgarbase500g原装BD 285420
CHAPS1g/2.5g/10gAmresco分装
CHAPSO1g原装/5g原装INALCO1758-9322
CHES25g/100g/250g/500gAmresco 0392
(2-(环已胺)-1-乙磺酸)
Chitin10g/25g/100g/1kg原装Sigma C7170
(几丁质(甲壳素))
Chitosan25g/100g国产
(壳聚糖)
Chloramphenicol5g/25g原装/100g原装INALCO1758-9321
(氯霉素)
Chlormequatchloride100g/500g国产
(矮壮素)

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