悬浮细胞大多胞体呈圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长，容易大量繁殖。悬浮细胞培养虽比贴壁细胞少了消化的步骤，但培养起来同样不易。有碎片、形态改变、生长速度慢、细胞贴壁……每一种异常都牵动着我们的心。
因此本期细胞学堂整理了悬浮细胞收货和培养过程中的常见问题，并针对各个问题列出解决办法，带你逐个击破！
运输常见问题及处理方法
1、碎片多
处理方法：悬浮细胞受到运输或者其他因素导致细胞损伤时，容易产生细胞碎片，碎片可通过低速离心（800~1000rpm，3min）去除；低速离心同时也会丢失细胞，故细胞密度低的时候不适用，细胞密度低时应正常转速离心，保留细胞优先。
2、细胞不圆/形态变了/聚团
处理方法：悬浮细胞受到运输或者微环境变化影响时，可能出现变形，聚团等现象，在使用正确培养基和操作都正确的情况下，一般继续培养一周左右可以恢复原状。
培养过程常见问题及处理方法
1、细胞不圆/形态变了/聚团
处理方法如下：
少量细胞聚团、呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。通过静养（少操作，少观察）、补加血清（5%）等方式，让细胞密度增高逐渐适应环境后可以恢复正常；
血清品牌会影响细胞生长状态，如果一种不会聚团的细胞，养出来全部聚团，分散的细胞很少，这时候要考虑血清的影响。
2、细胞生长慢或不生长
处理方法：悬浮细胞有密度依赖性，在高密度下状态比较好，低密度时状态较差，所以传代比例要控制，细胞状态不好时，传代可以不用离心法，而是补液或者半换液的方式，以避免离心损失细胞。
3、细胞发生贴壁
处理方法如下：
细胞培养瓶静置时间太长，细胞沉底后会出现少量贴壁现象，但这种贴壁非常松，吹一下或拍一下细胞就可以起来；此现象为正常现象，无需特殊处理。
如果细胞贴的非常紧，形态已经变成类似于上皮样时，需考虑是否为细胞特性或者有其他因素刺激导致；
日常操作避免染菌以及使用优，质血清是预防悬浮细胞贴壁的有效方法。
培养小贴士
1、悬浮细胞常规推荐接种密度：3-5×105cell/mL，生长到2×106cell/mL左右可继续传代；该密度建议为理论值，实际按照每个细胞特性有波动；
2、培养悬浮细胞需要稳定的生长环境，少操作，少观察，更有利于细胞生长；
3、不建议将聚团的细胞频繁吹散，等待密度高和状态改善时，细胞会自行散开；部分细胞聚团生长为特性，吹散不利于生长，请注意查看相关培养说明；
4、有些细胞本身就是聚团生长(NK92,NK92MI,JURKAT,H209,ATT20等)，有些细胞本身就形态不圆（H9等），为正常现象，无需特殊处理
5、竖瓶培养可以促进细胞生长，但由于拿出来观察时都是横瓶，观察久了细胞会贴到底部，观察完再次竖起来就会有细胞挂在瓶底部，而细胞没有培养基滋润很快就会死掉并残留在壁上，从而导致养着养着细胞越来越少，贴壁细胞越来越多；因此，在培养瓶竖置操作时需注意吹下培养瓶底部的细胞，避免细胞残留。
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