提供者:上海雅吉生物科技有限公司 发布时间:2021/5/28 9:51:00 阅读次数:3473次 进入该公司店铺
本试剂盒采用热脱蜡方式和裂解条件释放组织切片中的DNA,很大程度上减少了因福尔马林交联对DNA的损伤。此外,采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和缓冲液系统进行FFPE DNA提取。整个过程不涉及有机试剂二甲苯,安全可行、简单快速;提取的基因组完整性好,纯度高,质量稳定。适用于医学临床检验以及科学研究。
产品特点:
方便快捷:整个操作过程在1小时内完成。
安全可行:不涉及二甲苯等有机试剂。
经济:无需蛋白酶K消化,特异的吸附柱和裂解液提取高纯度的DNA。
储存条件:
该试剂盒置于室温(15–25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2–8℃
下游应用:
使用本试剂盒提取的FFPE DNA可适用于多种下游应用,如PCR和real-time PCR;SNP基因分析和STR基因分析;药物基因组学研究等。
实验例

操作步骤
次使用应按照试剂瓶标签的说明在GD和PW中加入无水乙醇! 所有离心步骤均为使用
台式离心机在室温下离心。
1.样本处理
a. 石蜡切片:取石蜡切片(5-10 μm厚,1×1 cm2
大小)5-8张。
b. 石蜡块:手术刀刮取约30 mg的组织样本(尽量去除多余的石蜡)。
注意:如果样品表面暴露于空气中,初刮取的2~3片弃掉不用。
c. 福尔马林等固定液中的样本:取30 mg样本,用手术刀切为数块,置于1.5 ml离心管中,
加入500 μl PBS (10 mM,pH7.4)涡旋振荡混匀12,000 rpm(~13,400×g )室温离心1 min,
弃上清,重复3次。
2. 将样本装于1.5 ml无菌离心管中,加入500 μl裂解液GL,再加入50 μl缓冲液GP,剧烈涡
旋10 sec。
3. 98℃孵育30 min,期间颠倒混匀3次,直至样品溶解。
注意:水浴请用长镊子操作。
4. 12,000 rpm(~13,400×g )室温离心5 min。
5. 使用200 μl枪头沿管壁小心吸取中间层的水相清液于新的离心管中(上层是石蜡及蛋白混
合物,下层为少许杂质沉淀,如果分层不可以延长离心时间,直到上层混合物和水
相清液很好的分开)。
6. (可选步骤)如果要去除RNA,可以将样品中加入2 μl RNase A(100 mg/ml),室温孵
育2 min后,进行下一步操作。
7. 加入2倍体积的无水乙醇(例:450 μl水相清液加入900 μl无水乙醇),充分混匀,静置3
min。
8. 将上一步所得的混合液加入一个吸附柱CR2中,8,000 rpm(~6,000×g )室温离心2 min,
倒掉收集管中的废液,重新将吸附柱放回收集管中。
注意:吸附柱容量为700 μl,可将剩余液体重复上述步骤上柱。
9. 向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD,8,000 rpm(~6,000×g ) 室温离心1 min,倒掉收
集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
10. 向吸附柱CR2中加入600 μl 漂洗液PW 8,000 rpm(~6,000×g )室温离心1 min,倒掉收集
管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
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