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石蜡包埋组织DNA快速提取试剂盒

提供者:上海雅吉生物科技有限公司   发布时间:2021/5/28 9:51:00  阅读次数:3473次  进入该公司店铺

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杨*
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产品简介:

本试剂盒采用热脱蜡方式和裂解条件释放组织切片中的DNA,很大程度上减少了因福尔马林交联对DNA的损伤。此外,采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和缓冲液系统进行FFPE DNA提取。整个过程不涉及有机试剂二甲苯,安全可行、简单快速;提取的基因组完整性好,纯度高,质量稳定。适用于医学临床检验以及科学研究。

产品特点:

方便快捷:整个操作过程在1小时内完成。

安全可行:不涉及二甲苯等有机试剂。

经济:无需蛋白酶K消化,特异的吸附柱和裂解液提取高纯度的DNA。

储存条件:

该试剂盒置于室温(15–25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2–8℃

下游应用:

使用本试剂盒提取的FFPE DNA可适用于多种下游应用,如PCR和real-time PCR;SNP基因分析和STR基因分析;药物基因组学研究等。

实验例


操作步骤

次使用应按照试剂瓶标签的说明在GD和PW中加入无水乙醇! 所有离心步骤均为使用

台式离心机在室温下离心。

1.样本处理

a. 石蜡切片:取石蜡切片(5-10 μm厚,1×1 cm2

大小)5-8张。

b. 石蜡块:手术刀刮取约30 mg的组织样本(尽量去除多余的石蜡)。

注意:如果样品表面暴露于空气中,初刮取的2~3片弃掉不用。

c. 福尔马林等固定液中的样本:取30 mg样本,用手术刀切为数块,置于1.5 ml离心管中,

加入500 μl PBS (10 mM,pH7.4)涡旋振荡混匀12,000 rpm(~13,400×g )室温离心1 min,

弃上清,重复3次。

2. 将样本装于1.5 ml无菌离心管中,加入500 μl裂解液GL,再加入50 μl缓冲液GP,剧烈涡

旋10 sec。

3. 98℃孵育30 min,期间颠倒混匀3次,直至样品溶解。

注意:水浴请用长镊子操作。

4. 12,000 rpm(~13,400×g )室温离心5 min。

5. 使用200 μl枪头沿管壁小心吸取中间层的水相清液于新的离心管中(上层是石蜡及蛋白混

合物,下层为少许杂质沉淀,如果分层不可以延长离心时间,直到上层混合物和水

相清液很好的分开)。

6. (可选步骤)如果要去除RNA,可以将样品中加入2 μl RNase A(100 mg/ml),室温孵

育2 min后,进行下一步操作。

7. 加入2倍体积的无水乙醇(例:450 μl水相清液加入900 μl无水乙醇),充分混匀,静置3

min。

8. 将上一步所得的混合液加入一个吸附柱CR2中,8,000 rpm(~6,000×g )室温离心2 min,

倒掉收集管中的废液,重新将吸附柱放回收集管中。

注意:吸附柱容量为700 μl,可将剩余液体重复上述步骤上柱。

9. 向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD,8,000 rpm(~6,000×g ) 室温离心1 min,倒掉收

集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

10. 向吸附柱CR2中加入600 μl 漂洗液PW 8,000 rpm(~6,000×g )室温离心1 min,倒掉收集

管中的废液,将吸附柱放回收集管中。


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