本试剂盒仅供科研使用
BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书
(货号：WS8140F 分光法 96 样)
一、产品简介：
BCA 蛋白含量试剂盒提供一种简单，快速，耐去污剂（多 5％）的检测蛋白质浓度
的方法。由于蛋白质能将 Cu2+还原成 Cu+；BCA 可与 Cu+结合生成紫蓝色复合物，在 562nm
处有da光吸光值，颜色的深浅与蛋白含量成正比，因此可根据吸光值测定蛋白质浓度。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂 A
液体 50mL×2 瓶
4℃保存
依据实验用量，临用试剂
A:B=50:1 的比例混匀成反应 mix
试剂 B
液体 2mL×1 支
4℃保存
标准品
液体 1.5mL×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、恒温水浴锅、移液器。
四、蛋白含量测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液（提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水）
冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验可以先选 2
个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
② 细菌或细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验可以先选 2
个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
③ 液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长到 562 nm，蒸馏水调零。
② 反应 mix 置于 60℃水浴预热 30 min（仅煮一次即可）。
试剂名称（μL）
测定管
空白管（只做一次）
样本
20
蒸馏水
20
反应 mix
800
800
混匀，于 60℃保温 30min，全部转移到 1mL 玻璃比色皿
中，于 562nm 处测定吸光值 A，△A= A 测定-A 空白。
【注】：若△A﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定。本试剂盒仅供科研使用
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五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0687x - 0.0006；x 是标准品质量：μg，y 是△A。
2、Cpr (mg/g 鲜重)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷(V1÷V×W) ×D
=0.728×(△A+0.0006) ÷W×D
3、Cpr (mg/mL)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷V1×D=0.728×(△A+0.0006)×D
4、Cpr (μg/104 cell))=[(△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=1.46×(△A+0.0006)×D
V－－-提取液体积：1mL；
V1－－-加入粗提液体积：0.02mL；
W－－-样本质量：g；
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1；
500－－-细菌或细胞总数，万。
附：标准曲线制作过程：
1 标准品母液（500μg/mL）。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 2.5,5, 25, 50, 250, 500. μg/mL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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