环丙氨嗪，又名“灭蝇胺”，养殖场通常称为“蝇蛆净”，属于1, 3, 5-三嗪类昆虫生长调节剂。环丙氨嗪也是种高效的昆虫生长抑制剂，常作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业动物饲料中，以原药以及代谢产物的形式随粪便排出体外，并沉积在粪便中以杀灭粪便中的蝇蛆，从而控制畜禽舍以及周围环境中的有害昆虫，达到净化环境的目的，且能提高动物生长性能。在动物养殖生产过程中，许多养殖户为了减少养殖场的蚊蝇，把环丙氨嗪长期应用于动物饲料中，导致畜禽肌肉组织中药物残留超标，严重威胁着消费者身体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药大残留限量》中明确规定了环丙氨嗪在动物靶组织中的残留限量，并且规定泌乳期禁用。

本文阐述了如何将环丙氨嗪和三聚氰胺从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标GB 29704-2013，为检测人员和相关域研究人员提供定的参考。

检测项目：环丙氨嗪、三聚氰胺

应用范围：鸡的肌肉、肾脏和蛋

超高效液相色谱-串联质谱法

方法原理：试料中残留的环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺，用3 %三氯乙酸溶液提取，MCX柱净化，超高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

处理仪器：

分析天平（感量0.00001 g和0.01 g）；涡旋混合器；离心机；氮吹仪；离心管（50 mL），微孔滤头（0.2 μm）；固相萃取装置。

检测仪器：UHPLC-MS/MS+ESI源

样品的制备与保存

1. 鸡蛋

取新鲜或冷冻空白或供试鸡蛋，去壳，并使均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料；

取均质后的空白样品，作为空白试料；

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

2. 鸡的肌肉和肾脏组织

取新鲜或冷冻空白或供试组织，绞碎，并使均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料；

取均质后的空白样品，作为空白试料；

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

所有试料在零下20 ℃以下保存。

处理方法

1.提取

称取试料2 g±0.02 g，于50 mL离心管中，加3 %三氯乙酸溶液20 mL，涡旋混合30 s，超声10min，静置10min，10000 r/min离心10min，取上层液，备用。

2.净化

MCX柱（60 mg，3 mL）依次用甲醇3 mL和水3 mL活化，取备用液10 mL过柱，加2 %甲酸水溶液3 mL、甲醇3 mL淋洗，抽干，加5 %氨化甲醇溶液3 mL洗脱，抽干，收集洗脱液，于50 ℃氮气吹干，用50 %乙腈水溶液1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供液质测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用50 %乙腈水溶液配成1mg/mL标准储备液，在2 ℃～8 ℃避光保存，可使用3个月。

2.本方法使用三氯乙酸溶液提取目标化合物，阳离子交换柱进行富集净化，稀释倍数=2，相当于1 g试料进行上机检测。

3.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液滴滴地流下，以保证离子交换的效果。

4.氨水甲醇溶液现用现配，避免氨水挥发，影响洗脱效果；洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入，可以增加洗脱率。

5.由于环丙氨嗪和三聚氰胺性比较强，建议选用长的（150 mm）亲水型色谱柱，保证色谱峰的保留效果。

6.本方法使用基质曲线进行定量，还可以使用环丙氨嗪和三聚氰胺相对应的同位素内标配制标准曲线。

参考文献

GB 29704-2013 食品安全国家标准动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺多残留的测定超高效液相色谱-串联质谱法
https://www.gbw-china.com/?channel=ayi