本试剂盒仅供科研使用
6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）试剂盒说明书
（货号：WS5080W 微板法 96 样）
一、产品简介：
6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH；EC 1.1.1.49）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细
胞中，是磷酸戊糖途径的关键酶，同时维持 NADPH 在细胞内的水平， NADPH 反过来维
持细胞中谷胱甘肽的水平进而保护细胞免受氧化损伤。因此 G6PDH 活性的高低可以从一
定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH 催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯，同时将 NADP+还原为 NADPH，
传统方法是检测 NADPH 在 340nm 处的吸光值。由于 NADPH 的摩尔消光系数（
ε）较低，
所以这种方法灵敏度低，且严重受到干扰。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：该酶促过程产生的 NADPH 与特异的
显色剂反应，产生在 450nm 处有da吸收峰的有色物质，通过检测该有色物质在 450nm 的
增加速率，进而计算出 G6PDH 酶活性的大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 25mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用加入 19mL 试剂一充分溶解，
用不完的试剂 4℃保存;
试剂三
液体 1.1ml×EP 管
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
[注]：粉剂量在 mg 别，使用用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰。
四、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
液；超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
4ºC 约 12,000rpm 离心 10min，取上清作为待测样品。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，设置温度 37℃,调节波长至 450nm。
② 试剂放在 37℃水浴 5min；
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
10
试剂二
180本试剂盒仅供科研使用
2
试剂三
10
混匀，立即于 450nm 处读取 A1 值，20min 后读取 A2 值，
（观察：酶活性越大，则黄色越明显）ΔA=A2-A1。
【注】：若ΔA 过小，可以延长反应时间（如：60min 或更长）再读取 A2，或加大样本取样量（如
增加到 0.2g），重新调整的反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y =0.0804x-0.0003，x 是 NADPH 摩尔质量：nmol,y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：在 37℃，每毫克组织蛋白每分钟使 1 nmol 6-磷酸葡萄糖氧化成 1 nmol 6 -磷酸葡
萄糖酸内酯并且使 1 nmol NADP+转换成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（nmol/min /mg prot）＝[(ΔA+0.0003) ÷0.0804]÷ (V1×Cpr) ÷T
=62.189×(ΔA+0.0003)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：在 37℃，每克组织每分钟使 1 nmol 6-磷酸葡萄糖氧化成 1 nmol 6 -磷酸葡萄糖酸
内酯并且使 1 nmol NADP+转换成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（nmol /min /g 鲜重）＝[(ΔA+0.0003) ÷0.0804]÷(W× V1÷V) ÷T
=62.189×(ΔA+0.0003)÷W
4、按细胞数量计算：
单位定义:在 37℃，每 104个细胞每分钟使 1 nmol 6-磷酸葡萄糖氧化成 1 nmol 6 -磷酸葡萄糖
酸内酯并且使 1 nmol NADP+转换成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（nmol /min /104 cell)= [(ΔA+0.0003) ÷0.0804]÷(500×V1÷V)÷T=0.1244×(△A+0.0003)
5、液体样本中 G6PDH 活力计算:
单位定义：在 37℃，每毫升液体每分钟使 1 nmol 6-磷酸葡萄糖氧化成 1 nmol 6 -磷酸葡萄糖
酸内酯并且使 1 nmol NADP+转换成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（nmol/min /mL）＝[(ΔA+0.0003) ÷0.0804]÷V1÷T=62.189×(ΔA+0.0003)
V－－－－加入提取液体积，1 mL； V1－－－－加入样本体积，0.01 mL； W－－－－样本质量，g。
T－－－－反应时间，20 min；若加大了反应时间，则重新调整的反应时间值要代入公式重新计算；
Cpr－－－－样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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