本试剂盒仅供科研使用
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）试剂盒说明书
（货号：WS4180W 微板法 96 样）
一、产品简介：
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH，EC 1.1.1.43）是磷酸戊糖途径中关键酶之一，在维
持细胞 NADPH 水平上起重要作用，与生物体能量平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶催化 6-磷酸
葡萄糖酸和 NADP+生成 NADPH。进而与特异显色探针反应生成有色物质，通过检测该有
色物质的增加速率，计算出 6-PGDH 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 25mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用甩几下使粉剂落入底部（量少，勿
损失），再加 17.5mL 试剂一充分溶解，
用不完的试剂 4℃保存;
试剂三
液体 1mL×EP 管
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、和蒸馏水。
四、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，设置温度 25℃,调节波长至 450nm。
② 试剂解冻至室温（25℃）；
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
20
试剂二
170
试剂三
10
混匀，25℃条件下，立即于 450nm 处读取 A1 值，20min
后读取 A2 值，（观察：酶活性越大，则黄色越明显）。
ΔA=A2-A1。
【注】：若ΔA 过小，可以延长反应时间（如：60min 或更长）再读取 A2，
或加大样本取样量（如增加到 0.2g），重新调整的反应时间 T 需
代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
2
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0795x - 0.0107，x 是 NADPH 摩尔质量（nmol）,y 是ΔA。
2、按蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH(nmol/min /mg prot) = [(ΔA+0.0107) ÷0.0795]÷(Cpr×V1)÷T
=31.45×(ΔA+0.0107)÷Cpr
3、按样本质量计算
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH 酶活性(nmol/min/g 鲜重) =[(ΔA+0.0107) ÷0.0795]÷(V1÷V×W)÷T
=31.45×(ΔA+0.0107)÷W
4、按液体体积计算
酶活定义：每毫升液体每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH 酶活性(nmol/min/mL)= [(ΔA+0.0107) ÷0.0795]÷V1÷T
= 31.45×(ΔA+0.0107)
V－－－－加入提取液体积，1 mL；
V1－－－－加入样本体积，0.02 mL；
W－－－－样本质量，g。
T－－－－反应时间，20 min；
Cpr－－－－样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. nmol/μL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 按照 20μL 标准品+170μL 试剂一+10μL 试剂三，根据结果即可制作标准曲线。
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