RNF91015

适用

REAGEN™辣椒素检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测辣椒，辣椒酱及局部止痛剂中的辣椒素。

检测原理

REAGEN™黄曲霉毒素检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。加入辣椒素及辣椒素酶标记物到测试孔中，样品中的辣椒素与辣椒素的酶标记物竞争结合连接在微孔上的辣椒素抗体。混合并培养30分钟之后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合分子，然后加入无色的底物溶液，培养10分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。颜色越深表明辣椒素含量越少，反之，辣椒素含量越高，加入停止液然后在酶标仪上读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的辣椒素浓度。

试剂盒的低检测限为： 1000 ppb

特异性

REAGEN™辣椒素检测试剂盒对于辣椒素有很强的特异性，以下表格展示了与其他形式的交叉反应率。

试剂及材料

试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之均可放心使用。

· 真空包装，包被有兔抗辣椒素抗体的8×12的微孔板 1块。

· 4瓶浓度为0、1、10、100ppb 辣椒素标准溶液。

· 1瓶酶标记物。

· 1瓶10倍浓缩的稀释液。

· 1瓶底物溶液。

· 1瓶停止液。

注意事项

1. 未使用时，试剂盒储存于2-4℃下。

2. 不可冷冻试剂盒或将其暴露在大于37℃的温度下。

3. 开始测定，所有样品及试剂达到室温（20-28℃为宜）。

4. 不可使用过期试剂。

5. 不同批次试剂不可混用。

6. 使用推荐方法确认阳性样品。

样品处理程序

样品稀释液的配置：取试剂盒中10倍浓缩的稀释液30ml，用水定容至300ml，混匀后成为样品稀释液。

辣椒油或干辣椒（稀释倍数：100000）

1. 准确称量0.1g样品到20ml离心管中。

2. 加入10ml甲醇到离心管中，混匀，超声萃取5min或震荡10min。

3. 用甲醇稀释萃取液1：1000倍稀释（取30ul萃取液到30ml纯甲醇中）

4. 稀释完的样品再用稀释好的样品稀释液按1:10稀释（取100ul上述稀释后样品加入到0.9ml样品稀释液中）

5. 取100ul待测。

辣味食品（稀释倍数：1000）

1. 将样品绞碎。

2. 准确称量1g样品到20ml离心管中。

3. 加入10ml甲醇到离心管中，混匀，超声萃取5min或震荡10min。

4. 用甲醇稀释萃取液1：100倍稀释（取100ul萃取液到10ml纯甲醇中）

5. 稀释完的样品再用稀释好的样品稀释液按1:10稀释（取100ul上述稀释后样品加入到0.9ml样品稀释液中）

6. 取100ul待测。

检测程序（注意标准及样品做平行试验，可以提高检测的准确度及精确度）

1. 开始实验要求试剂及样品萃取液达到室温。

2. 稀释标准溶液：分别取试剂盒中的四个标准溶液100ul加入到0.9ml样品稀释液中，混匀。

3. 取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条，与干燥剂同放入密封袋中保存。

4. 加入100ul的样品及标准品到相应的孔中，注意使用次性吸头防止交叉污染

5. 加入100ul酶标记物到微孔中，轻微震荡微孔板。

6. 室温下孵育30分钟。

7. 倒掉微孔中溶液，微孔中注满蒸馏水或纯净水，然后到掉，重复4次，共五次洗板。

8. 后次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。

9. 每孔中加入100ul的底物溶液。

10. 室温下孵育10分钟。

11. 每孔中加入100ul停止液。

12. 450nm读吸光度值。

结果判断

1. 半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的辣椒素含量大于此标准的辣椒素浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的辣椒素含量小于此标准的辣椒素浓度。

2. 定量结果判定，需要以标准浓度的对数值为X轴，标准的吸光度值百分比（Bo%=各标准浓度吸光度/0标准吸光度）为Y轴绘制曲线图，将标准浓度及吸光度百分比的点用直线连接，根据样品的吸光度值百分比在X轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于小标准的吸光度值或小于大标准的吸光度值，即可说明此样品中辣椒素的含量小于1.0ppb或大于100ppb。

样品换算：用从曲线上计算出样品的含量ppb/1000*稀释倍数*16SU/ppm,即为样品辣椒素的单位SU。